刘叔敏，范玉磊，梁婷婷，孙 影△

(1.河北联合大学基础医学院病理学系，河北唐山 063000;2.承德医学院附属医院普外科)

Pokemon、c-myc在结直肠癌中的表达及意义

刘叔敏1、2，范玉磊1，梁婷婷1，孙 影1△

(1.河北联合大学基础医学院病理学系，河北唐山 063000;2.承德医学院附属医院普外科)

目的:探讨结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白表达的变化和意义。方法:SP免疫组化法检测60例结直肠癌组织和癌旁正常组织Pokemon和c-myc蛋白的表达情况。结果:结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白的阳性表达率均明显高于正常组织(P＜0.01);结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白的阳性表达与分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关(P＜0.01，P＜0.05);结直肠癌组织中，Pokemon和c-myc蛋白的表达呈显著正相关(r=0.615，P＜0.05)。结论:Pokemon和c-myc对结直肠癌的诊断和预后评判具有一定的价值。

Pokemon基因;c-myc基因;结直肠癌

Pokemon(POK erythroid ontogenic factor)基 因 是近期新发现的原癌基因，在细胞分化中具有重要作用，可能位于许多肿瘤抑制基因和原癌基因的上游[1]。c-myc是一种原癌基因，在多种恶性肿瘤中均呈高表达状态，从而参与肿瘤的形成与发展[2]。本研究采用免疫组化法检测了Pokemon和c-myc在人结直肠癌组织中的表达及相关性，探讨二者在结直肠癌发生发展过程中的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2010年1月至2012年12月承德医学院附属医院60例结直肠癌手术切除标本，均经术后组织病理学确诊;同时选取距瘤缘＞5cm的癌旁组织作为对照。60例中，男28例、女32例，年龄35-85岁(平均66.5岁)。组织学分级:高分化21例，中分化28例，低分化11例;Dukes分期:Ⅰ期4例，Ⅱ期20例，Ⅲ期31例，Ⅳ期5例。所有患者术前均未行放射治疗和化学治疗。

1.2 免疫组化染色 采用SP免疫组化染色法，一抗为鼠抗，工作浓度为1:100，DAB显色，苏木素复染细胞核。以PBS代替一抗作为阴性对照，以试剂盒自带已知染色阳性切片作为阳性对照。

1.3 结果判断 Pokemon蛋白以细胞核内出现棕黄色细颗粒为阳性表达，c-myc蛋白以细胞质和核周出现黄色和棕黄色颗粒为阳性表达。采用二级计分法判定结果:①阳性细胞百分率:在5个高倍视野下(10×40)计数阳性细胞百分率，＜5%为0分，5%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，＞75%为4分。②染色强度:无阳性细胞为0分，淡黄色为1分，黄或深黄色为2分，褐色或棕褐色为3分。以①、②的乘积判定最终结果:0分为(-)，1-2分为(+)，3-4分为(++)，5-12分为(+++)。

1.4 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理，计数资料采用卡方检验，相关分析采用Spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Pokemon和c-myc蛋白在结直肠癌组织中的表达情况结直肠癌组织Pokemon蛋白和c-myc蛋白的阳性表达率分别为71.7%(43/60)和86.7%(52/60)，均明显高于正常组织，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 Pokemon和c-myc蛋白在结直肠癌组织中的表达情况(n=60)

2.2 Pokemon和c-myc蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系 结直肠癌组织中，Pokemon和c-myc蛋白的表达与年龄、性别、浸润深度无关(P＞0.05);与分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关(P＜0.01，P＜0.05):低分化明显高于高中分化，Dukes分期Ⅲ+Ⅳ期明显高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移。见表2。

表2 Pokemon和c-myc蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系

2.3 结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白表达的相关性 52例c-myc阳性表达的病例中，42例Pokemon的表达也呈阳性，同时阳性表达率为70.0%(42/60);在17例Pokemon阴性表达的病例中，7例c-myc也呈阴性表达，同时阴性表达率为11.7%(7/60)。结直肠癌组织中，Pokemon和c-myc蛋白的表达呈显著正相关(r=0.615，P＜0.05)。见表3。

表3 结直肠癌组织Pokemon和c-myc蛋白表达的相关性

3 讨论

2005年，Meada等发现Pokemon在多种人类实体肿瘤，尤其是在腺癌和鳞状细胞癌中异常高表达[1，3]。本研究显示，结直肠癌组织Pokemon蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.01);并且发现，结直肠癌组织Pokemon蛋白的阳性表达与分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关。这与周莹群等的研究结果一致[4]。上述研究结果均提示，pokemon基因在诱导肿瘤分化中可能具有重要作用。

c-myc基因是一种常见的原癌基因，在生长信号的作用下，c-myc的过表达会帮助增殖;但当生长刺激信号缺失时，c-myc的过表达则会导致细胞凋亡[5-6]。本研究显示，结直肠癌组织c-myc蛋白的阳性表达率为86.7%，明显高于癌旁正常组织，与Harnicarova等报道的约70%的结直肠癌出现c-myc的过表达的结果一致，提示在结直肠癌发生过程中c-myc的过表达是一频发事件[7]。

研究发现，pokemon的Poz结构域可与c-myc发生相互作用，这种分子间的作用能增加细胞核内c-myc的表达水平并维持其稳定性，从而作为上游基因调控c-myc基因的转录[8]。本研究相关分析结果显示，结直肠癌组织Pokemon蛋白的表达与c-myc蛋白的表达呈显著正相关，说明Pokemon基因不但在结直肠癌发生发展过程中发挥作用，而且可能是通过促进原癌基因c-myc蛋白的表达实现的。而且本研究还发现，Pokemon与c-myc蛋白的表达均随肿瘤分化程度的降低、Dukes分期的增高及出现淋巴结转移而增高，不仅表明二者与直结肠癌的发生发展密切相关，而且提示这两种基因在结直肠癌的诊断尤其是预后的评估中可能具有一定的意义。

[1]Maeda T, Hobbs RM, Merghoub T, et al. Role of the protooncogene Pokemon in cellular transformation and ARF repression [J]. Nature,2005, 433(7023):278-288.

[2]Jemal A, Siegel R, Xu J, et al. Cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin, 2010, 60(5):277-300.

[3]Choi WI,Jeon BN, Yun CO, et al. Proto-oncogene FBI-1 represses transcription of p21CIP1 by inhibition of transcription activation by p53 and Sp1[J]. J Biol Chem, 2009, 284(19):12633-12644.

[4]周莹群，徐选福，邬赘斌.Pokemon基因在结直肠癌组织中的表达及其与p14ARF、P53蛋白表达的相关性[J].中华消化杂志，2008，28(4):273-275.

[5]Fernandez PC, Frank SR,Wang L,et al. Genomic targets of the human c-Myc protein [J]. Genes Dev, 2003, 17(9): 1115-1129.

[6]杜金凯，刘军.细胞凋亡的研究进展[J].承德医学院学报1997，14(2):153-155.

[7]Harnicarova A, Kozubek S, Pacherník J, et al. Distinct nuclear arrangement of active and inactive c-myc genes in control and differentiated colon carcinoma cells [J]. Exp Cell Res, 2006 312(20): 4019-4035.

[8]Moroy T, Saba I, Kosan C. The role of the transcription factor Miz-1 in lymphocyte development and lymphomagenesis-Binding Myc makes the difference[J]. Semin Immunol, 2011 23(5): 379-387.

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF POKEMON AND C-MYC IN COLORECTAL CANCER

LIU Shu-min, FAN Yu-lei, LIANG Ting-ting, et al
(Department of Pathology, Basic Medical Science College of Hebei United University, Hebei Tangshan 063000, China)

Objective:To investigate the expression and clinical significance of Pokemon and c-myc in human colorectal cancer.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of Pokemon and c-myc in 60 cases colorectal cancer and matched para-carcinoma tissues.Results:The positive expression rate of Pokemon and c-myc in colorectal cancer were obviously higher than that in normal tissue (P＜0.01). In colorectal cancer, the positive expression of Pokemon and c-myc were related with differentiation degree, Dukes stage and lymph node metastasis (P＜0.01, P＜0.05). The positive expression of Pokemon in colorectal cancer was positively correlated with c-myc expression (r=0.615, P＜0.05).Conclusions:Pokemon and c-myc have certain value for diagnosing and prognosis of colorectal cancer.

Pokemon gene; C-myc gene; Colorectal cancer

R735.3

A

1004-6879(2014)03-0198-02

2013-10-24)

△ 通讯作者