张海鹏

[摘要] 目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制。 方法 常规培养黑色素瘤细胞株A375，分为空白对照组（不含药物的DMEM处理）、As2O3组（10 μmol/L As2O3）、全反式维A酸（at-RA）组（10 μmol/L at-RA）、As2O3+at-RA组（10 μmol/L As2O3联合10 μmol/L at-RA）。MTT法检测细胞活力，划痕试验检测细胞迁移能力，Western-blot法检测MMP-2、Caspase-2的蛋白水平。 结果 ①As2O3+at-RA组的细胞活力为（35.8±7.3）%，低于As2O3组的（62.4±10.3）%和at-RA组的（59.3±11.3）%，差异有统计学意义（P < 0.05）；②As2O3+at-RA组的迁移能力相对值为（21.3±6.3）%，低于As2O3组的（55.4±9.5）%和at-RA组的（57.1±10.4）%，差异有统计学意义（P < 0.05）；③As2O3+at-RA组的Caspase-2蛋白含量为（274.1±42.4）%，高于As2O3组（175.2±29.4）%和at-RA组（181.4±23.8）%；As2O3+at-RA组的MMP-2蛋白含量为（36.2±8.2）%，低于As2O3组（64.2±10.4）%和at-RA组（62.7±9.4）%。 结论 As2O3和at-RA联合应用能够抑制黑色素瘤细胞株A375的增殖和迁移能力，这一作用可能是通过上调Caspase-2、下调MMP-2来发挥的。

[关键词] 黑色素瘤；三氧化二砷；维A酸；增殖；迁移

[中图分类号] R739.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）01（b）-0028-04

Effects of arsenic trioxide and retinoids on proliferation and migration of melanoma cell line A375 and its mechanism

ZHANG Haipeng

Department of Dermatological， Yuhang District Maternal and Child Care Service Centre， Zhejiang Province， Hangzhou 311100， China

[Abstract] Objective To study the effect of arsenic trioxide （As2O3） and retinoids on proliferation and migration of melanoma cell line A375 and its mechanism. Methods Melanoma cell line A375 were cultured and divided into vacuity contrast group （treated with DMEM）， As2O3 group （treated with 10 μmol/L As2O3）， at-RA group （treated with 10 μmol/L at-RA）， As2O3+at-RA group （treated with 10 μmol/L As2O3 and 10 μmol/L at-RA）. Then vitality was detected by MTT， migration was detected by wound-healing assay and protein level of MMP-2， Caspase-2 were detected by Western-blot. Results ①Cell vitality value of As2O3+at-RA group [（35.8±7.3）%] was lower than As2O3 group [（62.4±10.3）%] and at-RA group [（59.3±11.3）%]. ②Migration relative value of As2O3+at-RA group [（21.3±6.3）%] was lower than As2O3 group [（55.4±9.5）%] and at-RA group [（57.1±10.4）%]. ③Caspase protein level of As2O3+at-RA group [（274.1±42.4）% ]was higher than As2O3 group [（175.2±29.4）%] and at-RA group [（181.4±23.8）%]； MMP-2 protein level of As2O3+at-RA group [（36.2±8.2）%] was lower than As2O3 group [（64.2±10.4）%] and at-RA group [（62.7±9.4）%]. Conclusion As2O3 combined with at-RA can reduce the migration and proliferation ability of melanoma cell line A375， and down-regulation of MMP-2， up-regulation of Caspase-2 may be its possible molecular mechanism.

[Key words] Melanoma； Arsenic trioxide； Retinoids； Migration； Proliferation

黑色素瘤是一类具有高度恶性生物学行为的皮肤肿瘤，来源于皮肤基底部的黑色素细胞。近年来，我国的黑色素瘤发病率不断升高，年发病例数已超过10 000例[1]。早期发现的患者可通过手术切除；中晚期患者则缺乏有效的治疗手段，手术切除困难，化疗效果不佳。基于黑色素瘤增殖、迁移等恶性生物学行为，探寻能够抑制该生物学行为的治疗方式具有积极的临床应用前景[2]。本研究通过培养恶性黑色素瘤细胞株A375来分析三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对其增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料

恶性黑色素瘤细胞株A375购买于中科院细胞库；DMEM培养基和胎牛血清均购买于Gbico公司；抗体购买于Abcam公司；离心管和细胞培养板购买于Corning公司；全反式维A酸（at-RA）、As2O3等药品购买于Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞复苏和培养方法 将细胞从液氮罐中取出后迅速置于37℃水浴锅中，并将细胞悬液移入15 mL离心管中，1000 r/min离心10 min，弃上清后用5 mL含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬，移入培养瓶中在37℃、5%CO2孵箱中培养。……