李金明，谢南，隋明月，朱冬红

(南昌市第九医院，江西南昌330003)

芯片技术对南昌地区HIV-HCV合并感染者的HCV基因型研究

李金明，谢南，隋明月，朱冬红

(南昌市第九医院，江西南昌330003)

目的了解芯片技术对南昌地区HIV-HCV合并感染者的HCV基因型分布。方法2008年10月至2013年11月期间，在南昌地区就诊的285例HIV感染患者进行HCV筛查，并对HCV阳性患者的基因型进行芯片技术检测，将其检测结果与测序结果进行比对；同时对HIV-HCV合并感染者进行流行病学调查。结果芯片技术可检测出约900拷贝/ml的丙型肝炎病毒的基因型，HIV感染者中，HCV阳性比率为19.3%，HIV-HCV合并感染者的HCV基因型分布情况为1b型41例，2a型9例；3b型1例,6型1例，还有1 b+2a型3例；芯片检测结果与基因测序结果完全一致。结论芯片技术灵敏度高，准确性好，HCV基因型分布以1b基因型为主，其次为2a型；HIV感染者的感染传播途径有了新变化，性传播感染HIV比例在增加，但性传播合并感染的比例较低。

芯片技术；HIV-HCV合并感染；HCV基因型

HIV即人类免疫缺陷病毒，而HCV即丙型肝炎病毒。近年来，HCV的发病率呈现高发态势[1]。二者均严重威胁人类健康，且传播途径相似，因此对于二者的合并感染应加大重视。由于HCV基因的变异性，其存在多个基因型[2]。HCV的基因型对丙肝的临床进展、肝细胞癌及抗病毒治疗都紧密相连。因而，及时准确地检测出HCV的基因型，显得尤为重要。目前，可通过测序法及芯片技术对HIV-HCV合并感染者的HCV基因型进行检测。为了了解芯片技术对南昌地区HIV-HCV合并感染者的HCV基因型分布。2008年10月至2013年11月期间，在南昌地区就诊的285例HIV感染患者进行HCV筛查，并对HCV阳性患者的基因型进行芯片技术检测，将其检测结果与测序结果进行比对；同时对HIV-HCV合并感染者进行流行病学调查。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2008年10月至2013年11月期间，选取在南昌地区就诊的285例HIV感染患者，男性患者154例，女性患者131例，年龄19～76岁，平均年龄为(41±8)岁，285例患者均由当地CDC确诊。对HIV患者进行HCV筛查时，根据2000年修订版《病毒性肝炎防治方案》及《丙型肝炎防治指南》对患者进行诊断。并且所有患者的抗-HCV和HCV RNA的检测结果均为阳性，且排除其他感染。参与本研究的患者，均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 试验仪器及试剂丙肝病毒抗体IgG(HCVIgG)ELISA检测试剂盒由上海科华生物科技有限公司提供。荧光定量PCR基因扩增仪为美国ABI-7500型，阳性判断标准为检测值＞500拷贝/ ml。中国科学院上海微系统与信息技术研究所提供丙型肝炎病毒基因分型检测芯片[3]。

1.2.2 标本采集对于HIV感染者，若患者自愿进行肝炎标志物筛查，可在清晨空腹抽取5ml静脉血，使用EDTA抗凝，将血浆离心后，保存于-70℃冰箱中。并对参与研究的患者进行记录。

1.2.3 抗HCV检测使用ELISA方法。

1.2.4 芯片技术检测根据丙型肝炎病毒基因分型检测芯片提供的说明书进行检测。可将特定的寡核苷酸片段在固定支持物上规律排列，而后根据碱基配对将待测样品(待测样品通过抽提和逆转录后，采用巢式PCR扩增)杂交，再扫描芯片，并对比分析各个探针产生的荧光信号[4]，从而得出结果。

1.2.5 测序法检测使用基因扩增仪对目的片段进行扩增，把合成引物一起进行核苷酸序列测序。

2 结果

2.1 HIV感染患者的HCV阳性比率285例HIV感染患者标本经检测发现55例抗-HCV和HCV RNA双阳性，HCV阳性比率为19.3%。

2.2 55例HIV-HCV合并感染患者的HCV基因型分布的芯片检测与基因测序若PCR扩增的产物呈现阳性，则可使用芯片技术将该标本杂交处理与分析，芯片检测结果为1b型41例，2a型9例；3b型1例,6型1例，还有1 b+2a型3例。同时，随机选择20例标本进行基因测序验证，测序结果与芯片检测结果完全相同。

2.3 HIV-HCV合并感染者的HCV感染途径55例HIV-HCV合并感染者中，15例为静脉吸毒感染，38例为性传播感染,2例为纹身感染。见表1。

表1 HIV-HCV合并感染者的HCV感染途径[n(%)]

3 讨论

我国的肝炎发生率在全球居于较高水平。大部分感染者最终都会发生慢性肝炎，甚至肝硬化，对人类的健康威胁较大。而HIV即艾滋病，近年来的发病率呈现高发态势。二者均可通过血液传播，性传播，传播途径相似，因此，若发生HIV合并HCV感染，应当对其加以重视。HCV基因已发生突变，且错配率也较高，因此其存在多个基因型。目前，多数观点认为HCV基因为有6种，同时存在多种基因亚型。由于HCV的基因型对丙肝的临床进展，肝细胞癌及抗病毒治疗都紧密相连，在加上其变异性的特点，需要找到一种迅速准确的检测方法，以判断患者是否发生HCV感染，以及发生HCV感染的基因型。目前，可通过测序法及芯片技术对HIV-HCV合并感染者的HCV基因型进行检测。测序结果最为准确，但是花费时间较多，程序较为复杂，且价格也很昂贵。而芯片技术是近几年发展起来的，能够快速准确地检测出患者的感染情况及感染基因混合型的方法[5]。

2008年10月至2013年11月期间，对南昌地区就诊的285例HIV感染患者进行HCV筛查，发现285例HIV感染者中，HCV阳性患者为55例，阳性比率为19.3%，与相关报道结果相符[6]。由于本芯片技术采用巢式PCR扩增，灵敏度较高，芯片技术可检测出约900拷贝/ml的丙型肝炎病毒的基因型；然后对HIV-HCV阳性患者的HCV基因型进行芯片技术检测，将其检测结果与测序结果进行比对，结果芯片检测与基因测序完全一致，准确率高达100%。由于样本量较小，基因测序结果与芯片检测结果完全没有差异，有待扩大样本量进一步深入研究。通过以上结果我们可以看到，基因型分布中，占比最大的为1b型，其次为2a型，混合基因型有3例，这一结果也与国内其他研究相吻合[7]。多种基因型包括混合基因型的出现，表明HCV基因型逐步多样化。由于本次研究的样本量相对较少，因此研究结果只能在一定程度上反映南昌地区的HIV-HCV合并感染患者HCV基因分型情况。该结果的出现，可能和南昌地区疾病的传播途径、亲缘关系及HCV的免疫具有相关性。同时对HIV-HCV合并感染者进行流行病学调查，发现其感染途径主要为静脉吸毒、性传播和纹身。并系统调查研究了艾滋病感染者(AIDS)合并感染HCV的基因型，静脉注射吸毒感染者(15例)HIV合并HCV感染的阳性率高于性传播感染人群，可能因为静脉注射吸毒是艾滋病病毒(HIV)与丙型肝炎病毒(HCV)合并感染的主要传播途径。性传播感染中HIV合并HCV感染者(38例)，基因型比较单一。课题组2013年始陆续接受了院外的HIV病毒载量检测任务，将继续检测和收集艾滋病合并丙肝感染标本HCVRNA数据，与单独感染HCV者血浆HCV病毒负荷进行比较，研究HIV感染及艾滋病抗病毒治疗对HCV患者血浆中HCV病毒负荷影响。

综上所述，芯片技术灵敏度高，准确性好，南昌地区HIV-HCV合并感染者HCV基因型分布以1b基因型为主，其次为2a型；且HIV感染者(AIDS)的感染传播途径有了新变化，性传播感染HIV比例在增加，但性传播合并感染的比例较低。

[1]邓莉平,桂希恩,高世成,等.湖北省部分地区经血途径感染艾滋病人群中丙型肝炎病毒基因型分布[J].中华全科医师杂志，2012,06 (11):441-443.

[2]陈谐捷,蔡卫平,叶露,等.干扰素对HIV/HCV合并感染者抗HCV早期疗效观察[J].中华实验和临床感染病杂志,2011,02(13)：124-125.

[3]雷华,樊萍,庄林.艾滋病毒和丙型肝炎病毒合并感染的相关分析[J].国际流行病学传染病学杂志,2010,12(3):76-78.

[4]龚建明,杨静静,王吴.南京地区吸毒人群丙型肝炎的常见基因型分型研究[J].东南国防医药,2009,11(3):199-201．

[5]李金明,谢南,熊德琴,等.基因芯片法检测乙肝病毒多位点变异的临床应用[J].实验与检验医学,2009,27(6):615-616.

[6]齐晓彤,谢南,李金明,等.临床艾滋病患者合并病原微生物感染的分析[J].实验与检验医学,2012,30(5):492-493.

[7]刘静,杨洋,龚菊丽,等.HIV-1/HCV合并感染者中HCV基因亚型流行情况调查[J].中华流行病学杂志,2009,07(9):213-214.

The analysis of HCV genotype with the DNA-chip technology in the concurrent infection of HIV-HCV patients in Nanchang

Objective To evaluate the distribution of HCV genotype with the DNA-chip technology in the concurrent infection of HIV-HCV patients in Nanchang.Methods During October 2008 and Novembe 2013,HCV screening were performed in 285 HIV patients,the HCV genotype was detected by DNA-chip technology,and the results were compared with the DNA sequencing results.Results DNA-chip technology could detect about 900 copies/ml of HCV DNA.The positive rate of HCV infection was 19.3%in HIV patients.41 patients had the 1b HCV genotype,9 patients had the 2a HCV genotype,1 patient had the 3b HCV genotype,1 patient had the 6 HCV genotype,3 patients had the 1 b+2a HCV genotype.The results of the DNA-chip technology and the results of DNA sequencing were the same.Conclusion The DNA-chip technology has high sensitivity and accuracy. The major HCV genotype in HIV patients is 1b,and then 2a.The HIV transmission route has changed,the sexually transmitted HIV is increasing,but the rate of concurrent infection is low.

DNA-chip technology；Concurrent infection of HIV-HCV；HCV genotype

R512.91,R512.6+3,R446.62

A

1674-1129(2014)04-0395-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.010

LI Jinming,XIE Nan,SUI Mingyue,et al.
The Ninth Hospital of Nanchang City,Nanchang 330003，China.

2014-03-14；

2014-05-17)

江西省南昌市科技局课题项目(编号：2011-158-32)

李金明，男，1975年3月出生，本科，医学学士，副主任技师。研究方向：免疫与分子生物学。