滕军，况磊

(贵阳医学院公共卫生学院，贵州贵阳550004)

蜂胶中两种合成降糖药物及蜂胶质量的快速鉴定

滕军，况磊

(贵阳医学院公共卫生学院，贵州贵阳550004)

目的建立有效分离蜂胶中的各组分，并同时测定蜂胶中非法添加吡格列酮和罗格列酮等2种化学合成降糖药物的方法。方法采用薄层系统对蜂胶进行双向展开、分离、显色及刮板，提取后在紫外区扫描测定其吸收曲线；用薄层色谱法和分光光度法同时进行定性分析。结果在选定条件下，蜂胶中的黄酮类物质被有效分离，2种合成降糖药物均被检出，检出限为2μg/mg，整个分析时间不超过2h。结论本方法操作简单，快速准确，可用于检测添加了上述合成降糖药物的蜂胶及蜂胶质量的快速筛查。

薄层色谱法；紫外分光光度法；蜂胶；噻唑烷二酮；检测

蜂胶是可以用来调节糖尿病患者身体机能的一种保健食品[1]；蜂胶组成复杂，含有大量的黄酮类、萜烯类、酚酸类及酯类等二十余类、300多种化合物；目前，对中成药中添加合成降糖药物的研究报道较多而对作为降糖保健食品的蜂胶则研究报道很少。蜂胶中一些成分尤其是黄酮类与合成降糖药物性质十分相似，不易分离，其前处理方法有浸提法、超声浸提法和固相萃取法等，这些提取方法要么处理时间长，要么操作繁琐，且各组分不易完全分离，对后续测定的仪器设备性能和操作人员技术要求较高；合成降糖药物的测定方法有薄层色谱法、高效液相色谱法和液相色谱-质谱法等[2～4]。

本研究首次将蜂胶成分分离和合成降糖药物测定融为一体，采用两种分析测试方法同时进行定性分析，操作简单，不涉及昂贵的仪器设备和耗材，提高了测定的准确性，同时也缩短了分析测定时间。

黄酮类化合物被认为是产生蜂胶药效的活性成分之一，所以是判断蜂胶质量的指标之一，其测定方法有分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法及毛细管电泳法等，这些方法或操作复杂，或运行成本高，本实验方法能快速分离蜂胶中的酮类物质并对其有效显色进行初步比较检测。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 主要仪器UV-160A型紫外-可见分光光度计(SHIMADZU，日本)，CP124C型电子天平(OHAUS CORPORATION上海)。

1.1.2 试剂与耗材标准品均购自中国食品药品检定研究院：盐酸吡格列酮(100%)，盐酸罗格列酮(91.3%)，以上标准品使用时用甲醇配制成2g/L浓度的溶液储存于4℃冰箱，使用不宜超过2周。羧甲基纤维素钠、三氯甲烷、乙醚、氨水、无水乙酸(冰乙酸)、硫氰酸铵、氯化钴等均为分析纯，甲醇为高效液相色谱用试剂，硅胶G(青岛海洋化工有限公司)，实验用水为二级水。显色剂：将3.0g硫氰酸铵与1.0g氯化钴溶于0.02L水即可。

1.1.3 样品实验用的6种蜂胶胶囊和1种苦瓜胶囊中有两种蜂胶胶囊购自药店，其余来自网购。

1.2 方法

1.2.1 薄层色谱法取一块以0.3%羧甲基纤维素钠水溶液为粘合剂，活化后的硅胶G薄层板(10cm×20cm)如图1所示，在距薄层板的两底边1cm且靠左边1cm处做两个标记，一边点盐酸吡格列酮与盐酸罗格列酮混标溶液，另一边直接点蜂胶3～5mg，以三氯甲烷-乙醚-甲醇-氨水-冰乙酸(11.5∶2.7∶1.3∶0.1∶0.06)为展开剂，分别相向展开9cm，挥干溶剂，再以20cm边为底边向上展开8.5cm，取出挥干溶剂，喷显色剂，黄酮类物质显蓝绿色，根据其斑块大小可初步判断蜂胶含量；噻唑烷二酮类药物显蓝色斑点，与噻唑烷二酮标准物成镜像对称的蜂胶端若有蓝绿色斑点，比较吡格列酮和罗格列酮的比移值(Rf)，即可判断该蜂胶是否添加了吡格列酮或罗格列酮降糖药物。

图1 薄层展开示意图

1.2.2 分光光度法按1.2.1方法另取一块薄层板点样，将混标点换成空白蜂胶添加混合标准点样，展开显色后分别刮取空白硅胶、标准斑点和疑似药品斑点于小烧杯中，加0.003～0.004L甲醇，充分提取后用滤膜(0.5μm)过滤入1cm石英比色皿中，以空白硅胶管为参比，于波长200nm～350nm扫描作吸收曲线，比较标准与疑似药品吸收曲线即可判断该蜂胶是否添加了吡格列酮和罗格列酮降糖药。

2 结果

2.1 比移值吡格列酮的水平及垂直Rf值分别约为0.63、0.59，罗格列酮的水平及垂直Rf值分别约为0.69、0.66。

2.2 吸收曲线于空白蜂胶中分别加入吡格列酮和罗格列酮标准品，按1.2.2方法进行吸收曲线测定(空白硅胶测定用溶剂作参比，药品测定用空白硅胶作参比)，结果如图2

图2 空白及药品吸收曲线

2.3 检出限将噻唑烷二酮标准品分别加入到空白蜂胶中，按1.2.1方法进行测定，测得蜂胶中吡格列酮、罗格列酮2种降糖药的检出限均为2μg/ mg。

2.4 样品测定应用本实验方法对具有降糖保健功能的6个蜂胶胶囊产品和1个苦瓜类软胶囊内容物进行分析检测，未检出吡格列酮和罗格列酮等2种化学合成降糖药物；根据黄酮含量判断，其中1个蜂胶胶囊产品含蜂胶微乎其微。

3 讨论

蜂胶成分随产地和采集季节的不同而不同[5]，其组成与蜜蜂所采集的当地树胶和其他植物原料有许多相似之处，所以，在分析判断其质量时应采用多指标进行综合评价。

作吸收曲线时，实验中使用的标准品的量应尽可能与样品中的疑似药品含量相当。当药品含量较低时，要注意参比的选用。

由于本实验检测的合成降糖药物性质不稳定，随着时间的延长，各药品的吸收曲线会发生变化(其改变规律有待进一步研究)，因此，药品显色提取后应及时与展开显色取样的标准品同时进行分析测定比较；此外，随着pH值不同，各药品的吸收曲线会有所不同，所以标准品与样品pH值应保持一致。

蜂胶中有大量难分离且性质与合成降糖药物相似的色素，系统显色后，目标斑点有少量色素覆盖，但这些色素在紫外区产生的吸收不干扰测定。

当室温变化较大时，药品展开后Rf值略有改变，因此，随着实验温度的改变展开剂中氨水与冰乙酸比例要做微小的调整，以达到理想效果(可用标准品做预试验)。

[1]奇峰,周威,尹美珍.蜂胶可吸收成分对胰岛细胞的作用[J].中国医院药学杂志,2013,33(17):1390-1392.

[2]朱明达,马微,陈冬东,等.液相色谱-电喷雾串联质谱法同时测定蜂胶保健品中的活性成分和降糖西药[J].分析化学研究报告,2010,38(2):169-170.

[3]潘宇宏,王仕平,晏敏英,等.降糖类药品与保健食品中盐酸苯乙双胍的检测方法[J].中国药业,2008,17(16):36.

[4]Li N,Cui M,Lu X,et al.A rapid and reliable UPLC-MS/MS method for the identific ation and quantification of fourteen syntheic antidiabetic drugs in adulterated Chinese proprietary medicines and dietary supplements[J].Biomed Chromatogr,2010,24(11):1255-1261.

[5]王想想,周立东.蜂胶与其胶源植物的化学成分相关性研究综述[J]中药材.2007,30(4):487-492.

Detection of two synthetic antidiabetic drugs in propolis and quality inspection of propolis

Objective To establish a method which could effectively separate propolis constituents and simultaneously detect two chemical synthetic antidiabetic drugs which were added illegally in propolis,such as pioglitazone and rosiglitazone.Methods Propolis bidirectional expanding,separating,coloring and scraper were performed by thin layer system.Ultraviolet scanning was used to detect the absorption curve of the extractive.Thin layer chromatography and spectrophotometric method were simultaneously used to make a qualitative analysis.Results Under the selected conditions,the flavonoids in propolis were separated effectively.Two synthetic hypoglycemic drugs were detected,and their detection limits were 2μg/mg.The total analysis time was less than 2 hours.Conclusion The method is simple,rapid and accurate.It can be used for rapidly detecting of propolis'quality and the two kinds of synthetic hypoglycemic agents in propolis that mentioned above.

Thin layer chromatography;Uitraviolet spectrophotography;Propolis;ThiazolidInedione;Detection

R151.3

A

1674-1129(2014)04-0372-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.003

TENG Jun,KUANG Lei.
School of Public Health,Guiyang Medical University,Guiyang 550004,China.

2014-02-20；

2014-04-03)

为贵州省卫生厅科研课题(G2010-18)

滕军，出生于1964年，本科，高级实验师，主要研究方向为理化检验。