卢舒凡 李庆国 许淑芹

水蛭是我国传统中药，早在《神农本草经》中就有记载。同时，水蛭也是一味世界性的动物药，许多国家如埃及、欧洲都有外用活水蛭治病的传统。直到1884年，才由Haycraft发现医蛭提取物具有抗凝活性，拉开了水蛭素应用研究的序幕［1］。目前，我国对水蛭的研究主要侧重水蛭的各种疗效和药理作用，而对有效成分的研究远远滞后于国外，除氨基酸和抗凝活性成分测定外，国内大部分蛭类均未见有效成分的报道。在水蛭研究方面，目前存在的两大问题是物种来源混乱、有效成分不清晰。本研究以广东菲牛蛭(俗称“金边蚂蟥”)为材料，分离纯化其有效抗凝物质，为后续的结构分析、药理药效研究、剂型研制及应用打下基础。

材料与方法

1．仪器:JJ-2组织匀浆捣碎机(江苏金坛环宇科学仪器厂生产)，SHZ-82恒温振荡器(江苏金坛富华仪器有限公司生产)，TGL-16B高速台式离心机(上海安亭科技仪器厂生产)，中低压层析柱(上海楚定生产)，MSC050杯式超滤器(上海摩速有限公司生产)，电泳仪(北京伯乐科学公司生产)。

2．试验药品:广东菲牛蛭(广州水蛭生物科技有限公司生产)，DEAE-Sepharose F．F．(Amersham 公司)，SP-120-40/60-ODS-BP(Daiso公司)，凝血酶，纤维蛋白原，蛋白标准marker(均为Sigma公司生产)，BCA试剂盒(广州美津生物技术公司生产)。

3．凝血酶滴定法［2］:在 37．0 ±0．5℃恒温条件下，吸取样品20μl，置反应板孔中，加入含0．5%牛纤维蛋白原的三羟甲基氨基烷盐缓冲液200μl，混合均匀，恒温5min，滴加每1ml中50单位的凝血酶溶液(每分钟滴加1次，每次5μl，边滴加边搅匀)至凝固，记录消耗……