■马云洪 祁宏伟

（1.梨树县畜牧兽医培训中心，吉林梨树 136500；2.吉林省农业科学院畜牧科学分院，吉林公主岭 136100）

动物肠道的菌群能够影响食物的消化能力、抵御感染和自体免疫，任何原因引起的肠道有益菌数量减少有害菌数量增加，都会打破肠道微生态平衡，进而阻碍动物对营养的消化吸收，影响动物的健康和生产性能的发挥。

本试验探讨不同添加水平的豆粕提取复合物对肉仔鸡肠道菌群的影响，及其促进肉仔鸡消化代谢的机理，为豆粕提取复合物对肉仔鸡肠道机能作用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计

选择健康状况良好的1日龄Avian肉仔鸡600只，按照公母各半的原则随机分为5个处理，每个处理设4个重复，每个重复30只。其中1组为对照组，只饲喂基础日粮，不添加抗生素添加剂。试验组分为4个组，分别为250 mg/kg处理组：基础日粮＋豆粕提取复合物250 mg/kg；500 mg/kg处理组：基础日粮＋豆粕提取复合物500 mg/kg；750 mg/kg处理组：基础日粮＋豆粕提取复合物750 mg/kg；1 000 mg/kg处理组：基础日粮＋豆粕提取复合物1000 mg/kg。试验期为49 d，分为前、后两期，前期0～21 d，后期22～49 d。

1.2 试验基础日粮

基础日粮按照肉鸡生长发育阶段营养需要自行配制。基础日粮组成和营养水平详见表1。

1.3 饲养管理

在试验前，首先对鸡舍进行彻底清洁和消毒，在试验期内对鸡舍每7 d消毒两次。前期0～21日龄肉仔鸡采用笼养方式，后期22～49日龄采用地上平养饲养方式。试验期间，对鸡舍的温度和湿度进行人工控制，保持良好通风换气，自由饮水和采食，按肉鸡标准化饲养管理进行。对肉仔鸡进行常规免疫，首先在7日龄时以滴鼻的方式接种鸡新城疫Ⅱ系弱毒苗；10日龄和24日龄时以饮水的方式接种传染性法氏囊疫苗；35日龄时，以饮水的方式对鸡新城疫Ⅱ系毒苗进行补剂。整个试验期间均不使用其他抗生素药物。

表1 基础日粮组成及营养水平(风干基础)

1.4 测定指标

1.4.1 样品的采集

试验鸡21日龄时，每处理组任意选择4羽，进行屠宰，对盲肠两端进行结扎，放入容器中，速冻-80℃保存备用。

1.4.2 盲肠微生物菌群的测定

称取盲肠的内容物0.5 g，加入到4.5 ml生理盐水的试管中，混匀，作为10-1稀释液，然后进行梯度稀释，直至10-8。将10-3～10-5三个稀释度分别吸取100 μl接种与相应的大肠杆菌的选择性培养基进行培养计数；将10-4～10-6三个稀释度分别吸取100 μl接种与相应的乳酸杆菌的培养基进行培养计数；将10-6～10-8三个稀释度分别吸取100 μl接种与相应的双歧杆菌的培养基进行培养计数。

1.4.3 培养基的制备

大肠杆菌培养基：伊红美蓝琼脂培养基（广东环凯微生物科技有限公司生产）；乳酸杆菌培养基(LBS)：蛋白陈10.0 g、酵母浸膏5.0 g、乙酸钠5.0 g、磷酸氢二钾2.0 g、葡萄糖20.0 g、牛肉膏10.0 g、柠檬酸铵2.0 g、硫酸镁 0.3 g、硫酸锰 0.25 g、吐温-80 1.0 ml、琼脂20.0 g、蒸馏水1 L。配好后加热融化，调pH值至5.4，高压蒸汽灭菌115℃，30 min；双歧杆菌杆菌培养基（BS）：胰胨8.0 g、蛋白胨10.0 g、酵母浸膏5.0 g、肝汤150 ml、葡萄糖10.0 g、牛肉浸膏3.0 g、吐温-80 1.0 ml、可溶性淀粉0.5 g、琼脂20.0 g、蒸馏水765 ml、10%的KH2PO4溶液 10 ml、A 溶液 5 ml：FeSO4·7H2O 0.5 g、NaCl 0.5 g、MgSO4·7H2O 10 g、MnSO40.337 g、蒸馏水250 ml。加热溶解后，用NaOH调节pH值至7.2，高压灭菌121℃，30 min，冷却至50℃左右时，加入L-半胱氨酸0.5 g，倾注无菌平皿，备用。

接种和计数：样品接种时，每个稀释度两个平行，乳酸菌和双歧杆菌在37℃培养48 h；大肠杆菌接种培养基在37℃培养24 h。

培养基计数：对平皿的菌落数进行计数，最后以每克盲肠内容物的菌落数lg菌数/g表示，其具体计算公式如下：每克盲肠内容物菌落数=lg菌落数×稀释倍数×每次稀释取样毫克数/接种用样品毫克数×样品克数。

1.5 数据处理

采用spss12.0统计软件的ANOVA过程对试验数据进行统计分析，采用Duncan法进行多重比较。试验结果数据以“平均值±标准差”形式表示。

2 结果与分析

豆粕提取复合物对肉仔鸡肠道微生物菌群的影响结果见表2。

表2 豆粕提取复合物对肉仔鸡肠道微生物菌群的影响（lgcfu/g）

由表2可见，与对照组相比，试验组盲肠内大肠杆菌含量均呈明显降低（P＜0.05），随着添加水平的增加，肠道大肠杆菌数量呈降低趋势，但是差异不显著(P＞0.05)；肠道乳酸菌，各试验组含量都有不同程度的增加，250 mg/kg组较对照组有微量的增加，但是差异不显著(P＞0.05)，其它3组与对照组数据比较差异显著（P＜0.05），其中以750 mg/kg组含量最高，比对照组提高了8.51%；肠道双歧杆菌，试验各组的含菌量随着豆粕提取复合物添加水平增加而呈现递增的趋势，与对照组比较均差异显著（P＜0.05）。相关分析表明，双歧杆菌含量y与豆粕提取复合物添加量x呈线性相关关系，线性回归方程为：y=0.101x+8.275，r=0.916 4。

3 讨论

肠道菌群是动物体内最大的微生态系统，畜禽的肠道中存在10-14个细菌，超过有500多种细菌定植在肠道。根据微生物和动物体的作用可以分为三类，第一类是共生性细菌，主要是转型厌氧，这些微生物主要是乳酸菌、双歧杆菌等；第二类是共栖的条件致病，在机体正常情况下，这类条件致病菌由于机体的对各种细菌的平衡作用其不具有致病能力，但是，当宿主的免疫力低下等因素时，这些条件致病菌就致病；第三类是病原菌。病原菌在动物体处于细菌等微生态平时，病菌并不能导致宿主患病；当宿主的机体免疫能力下降，这些病原菌开始大量繁殖，一起患者致病。大肠杆菌为革兰氏阴性肠道杆菌，一般情况下没有致病性，当宿主的肠道免疫力降低或者大肠杆菌的位置发生迁移的时候就会成为致病菌。

在正常的动物体内，肠道正常菌群能够形成菌膜，能够抑制病原菌的生长。乳酸杆菌为革兰氏阳性菌，是肠道中的正常菌群，其形态变化多样，杆状、短棒状等，一般情况下镜检为链状。其无芽孢，无鞭毛，高度耐酸。对维持肠道的正常菌群有重要的作用，乳酸杆菌还可以产生天然的抗生素，对肠道致病菌有明显的抑制和杀灭作用。并与有害微生物在肠道空间竞争营养，可以抑制有害微生物的生长例如迁移的大肠杆菌、沙门氏菌等等，乳酸菌主要是通过产生乳酸等类抗生素作用的物质，能够降低肠道的pH值，维持酸性环境，抑制有害微生物。乳酸杆菌不仅对致病菌有拮抗作用，而且能黏附于肠道细胞上，起到占位性保护作用，同时乳酸杆菌还可产生非特异性免疫调节因子，刺激肠道局部免疫反应。双歧杆菌属于革兰氏阳性菌，菌体形态多变，但是具有典型的分叉状形态，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，是在机体中存在时间较长的重要生理性细菌，黏附于上皮后，定植形成稳定的膜菌群即生物屏障，发挥重要的生理作用。能够通过降低肠道pH值或通过双歧杆菌对不利菌在空间、营养上的屏蔽竞争作用，来抑制有害菌在肠道中的定植和生长。可以提高机体的抗体水平，促进吞噬细胞的吞噬和消化能力，提高机体抗感染力，对动物体的生长发育、物质代谢有明显的改善作用。

4 小结

本研究中发现，豆粕提取复合物可以显著抑制或者减少肠道中大肠杆菌的数量，增加双歧杆菌和乳酸菌的数量。由于乳酸杆菌和双歧杆菌代谢作用产酸，使肠道的环境处于一个酸性环境中，可以抑制大肠杆菌等病原菌。豆粕提取物中的大豆多肽富含生长因子，具有促进双歧杆菌发酵，乳酸菌和其他微生物菌种增殖。豆粕提取复合物中的大豆低聚糖可以明显的提高双歧杆菌的生理活性和数量，调节肠道内细菌菌群的数量，抑制病原菌的繁殖，提高肠道内营养物质的消化、吸收能力。