马宗斌，刘桂珍，严根土 ，邓士政，黄 群，李伶俐，朱 伟

(1.河南农业大学农学院，郑州 450002;2.河南省种子管理站，郑州 450046;3.中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室，安阳 455000)

根据国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)发布的最新报道，2011年，全球转基因抗虫棉花总面积2500×104hm2，占全球棉花播种面积的69.4%;中国转Bt基因棉花面积达到390×104hm2，占中国棉花种植面积的71.5%［1］。转Bt基因棉花已在世界范围内商业化种植，通过有效控制棉铃虫种群数量，而显著减少了化学农药的用量［2-3］。棉田捕食性天敌种群数量上升，有效抑制了蚜虫的发生和危害，天敌进入大豆、花生、玉米等相邻作物大田，显著提升了整个农业生态系统的生物防治功能［4］。

今年以来，永济市在城市基层党建工作中，树立“全域党建”“开放党建”工作理念，将城区新建的4座城市驿站，打造成党群服务“微”阵地，整合各领域资源，发挥“八大”阵地功能，打通党员联系服务群众“最后一公里”，引领各领域党建“大融合”，城市基层治理走向共治共享“大格局”。

施氮可以有效地调节棉花氮素生理代谢及生长发育［5-6］。对转Bt基因抗虫棉而言，氮素既是核酸和蛋白质等生命物质的组成部分，也是杀虫晶体蛋白的主要构成物质。因此，氮素运筹可能是调节抗虫棉Bt蛋白代谢的有效途径。同时，棉花品种中导入Bt基因对其氮代谢也有重要影响［7-8］。在种植转基因棉花过程中，如何通过氮素运筹在生育前中期提高器官中Bt蛋白的含量，改善其抗虫性能，在生育后期降低器官的Bt蛋白的含量，减少对生态环境和人畜健康的潜在风险值得进一步研究。目前，已有研究表明，施氮量对棉花器官Bt蛋白的表达有显著调控作用［9-10］，但施氮方式对抗虫棉Bt蛋白含量的影响鲜见报道。为此，研究了施氮方式对抗虫棉Bt蛋白含量的影响，以期为抗虫棉合理施氮提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验主要环境条件及农艺管理措施

试验于2009—2010年在河南农业大学科教园区(郑州)进行，试验地为春白地，土壤为沙壤土，肥力中等。土壤有机质 9.26 g/kg，全氮 1.03 g/kg，碱解氮 83.50 mg/kg，速效磷 18.36 mg/kg，速效钾 96.56 mg/kg。2009年，从棉花播种至7月下旬，光、温条件较好，雨量适中，棉花出苗较好，生长发育较快;进入8月后直至9月中上旬，雨量偏多，光、温条件较差;9月下旬后，天气正常，雨水较少，阳光充足，有利于棉花正常成熟。2010年，在棉花苗期，雨量较多，地温回升较慢，棉苗发育略晚;6月中旬至8月中旬，气温正常，但阴天较多;8月中旬至9月下旬，雨量偏多，气温较常年略低，吐絮期推迟;9月下旬后，降雨较少，日照充足，积温较常年偏高，对棉铃吐絮较为有利。

老陈虽然当过侦察兵，但他还是被暗算了。如果我不告诉他那辆肇事车的车牌号，老陈哪会打电话举报那个家伙，他不举报也就不会被撞伤住院了。我觉得我应该去医院看看老陈，不然我内心会感到愧疚的。在去医院的路上，我买了一篮鸡蛋，一挂香蕉。到了医院，老陈见到我后，说你看你，破费干什么啊。老陈躺在床上，一条腿打了石膏。我问他没什么事吧。他自我解嘲地笑了笑，说想不到这次马失前蹄了。他们要是明着和我干，还真不是我的对手呢。

棉田磷肥和钾肥全部基施，每年整地时，施入过磷酸钙600 kg/hm2和氯化钾225 kg/hm2。全生育期分别在初花期和盛花期喷施缩节安化控两次，用量分别是37.5 g/hm2和60.0 g/hm2。2009年，全生育期未浇水;2010年在6月、7月各浇水1次。除处理措施外，各小区田间管理完全一致。

1.2 试验设计

2.4.1 不同施氮方式下棉花幼嫩器官Bt蛋白含量的比较

经统计结果显示,研究组冠心病患者的血清总胆红素、直接胆红素与间接胆红素三项指标均低于对照组健康体检者水平,P<0.05,;研究组的血清尿酸水平高于对照组,P<0.05,两组间胆红素与尿酸水平比较均存在统计学意义,见表1所示。

1.3 测定项目与方法

1.3.1 Bt蛋白含量

于2010年7月15日选定棉花当天新生的同一节位主茎叶片挂牌标记，在叶龄10、35、60、85 d(脱落为止)时取样，分别代表展开期、功能期、衰老期和脱落期的棉花叶片;8月1日选定同一果枝和节位3 mm的蕾挂牌标记，在现蕾后5、15、25 d取样，分别代表幼蕾、中蕾和大蕾;8月1日选定同一果枝和节位当天开放的花朵挂牌标记，在花后20、40、65 d取样，分别代表膨大期、充实期和吐絮期的棉铃。样品从田间取样后，在低温条件下快速带回实验室，立即称量1.0 g鲜样，放入自封袋。先用液氮快速冷冻30 min，后转入－40℃的超低温冰箱冻存，待测Bt蛋白含量。在叶片取样时避开叶脉，蕾用整个测定，铃分成铃壳、棉纤维和种子3部分。

Bt蛋白的测定采用酶联免疫分析法(ELISA)［11］，药盒由中国农业大学提供。

1.3.2 棉花测产

每小区选定中间2行，调查成铃数。收获10株絮铃，测定铃重和衣分，测算产量。

1.4 数据分析

2.3.2 施氮方式对棉纤维中Bt蛋白含量的影响

2 结果与分析

2.1 施氮方式对抗虫棉叶片中Bt蛋白含量的影响

河南洛阳是中国著名历史名城，被誉为“千年帝都、牡丹花城”洛阳，不但牡丹文明天下，洛阳偃师的葡萄种植也享誉大江南北。

图1 施氮方式对抗虫棉叶片Bt蛋白含量的影响Fig.1 Effects of nitrogen fertilizer methods on the content of Bt insecticidal protein in leaves of transgenic cotton

2.2 施氮方式对棉蕾中Bt蛋白含量的影响

幼蕾是棉铃虫的主要为害对象之一，且棉蕾有较高的脱落率，其中的Bt蛋白也随之进入土壤环境。图2表明，随着棉蕾的生长发育，其Bt蛋白的含量呈快速上升的趋势。施氮方式对棉蕾中Bt蛋白含量有明显的影响。随着氮肥前移，棉蕾Bt蛋白含量有升高趋势(大蕾期T2除外)。方差分析表明，在幼蕾期和大蕾期，T4处理的Bt蛋白含量与其余3个处理的差异达到极显著水平;在中蕾期，T4处理极显著高于T2和T1处理。

图2 施氮方式对转基因抗虫棉棉蕾Bt蛋白含量的影响Fig.2 Effects of nitrogen fertilizer methods on the content of Bt insecticidal protein in bud of transgenic cotton

2.3 施氮方式对抗虫棉棉铃不同器官中Bt蛋白含量的影响

没有思想解放就没有改革开放，一次大的思想解放，将会达成进一步改革的方向性的共识，因此思想解放永远在路上。

形成期的棉子是棉铃虫取食的器官之一，其中的Bt蛋白含量代表其抗虫性能;而棉子成熟期的Bt蛋白则成为残留物。由图5可以看出，在棉子的形成期，Bt蛋白含量极低，充实期迅速增加，至成熟期Bt蛋白含量增加更快。例如，T3处理的棉子Bt蛋白含量在充实期比形成期增加13.08倍，成熟期比形成期提高43.17倍。施氮方式对棉子中Bt蛋白含量的影响在不同生育阶段有所不同，总体表现为在前中期，氮肥施用相对均衡的T2和T3处理，棉子中Bt蛋白含量较高，氮肥前移或后移的T4和T1处理棉子中Bt蛋白含量则较低;至棉子成熟期，随着氮肥前移，棉子中Bt蛋白含量呈明显下降的趋势。例如，在成熟期，T2、T3和T4处理比T1处理的棉子Bt蛋白含量分别降低18.14%、27.69%和36.33%。方差分析表明，在棉子形成期和充实期，T2、T3处理的棉子Bt蛋白含量极显著高于T4和T1处理;在成熟期，不同处理Bt蛋白含量差异均达极显著水平。

棉铃虫主要取食膨大期棉铃的铃壳，此期Bt蛋白的含量对抗虫较为关键;而棉铃成熟期，铃壳也是Bt蛋白残留的主要器官之一。从图3可以看出，随着棉铃的生长发育，铃壳中Bt蛋白的含量呈先上升后下降的趋势。施氮方式对铃壳中Bt蛋白含量的影响在不同生育阶段有所不同。随着氮肥前移，膨大期和充实期铃壳中Bt蛋白含量呈上升趋势(T4处理除外);而到吐絮期，铃壳中Bt蛋白含量呈下降趋势。在膨大期，T2、T3和T4比T1处理的铃壳Bt蛋白含量分别增加79.73%、156.53%和37.16%。在吐絮期，T1、T2和 T3比T4处理的铃壳Bt蛋白含量分别增加89.50%、77.01%和76.37%。方差分析表明，在膨大期，T3处理铃壳中Bt蛋白含量极显著高于T1和T4处理;在充实期，T2和T3处理铃壳中Bt蛋白含量极显著高于T4和T1处理;至吐絮期，T4处理的Bt蛋白含量极显著低于其余3个处理。

图3 施氮方式对棉铃铃壳Bt蛋白含量的影响Fig.3 Effects of nitrogen fertilizer methods on the content of Bt insecticidal protein in boll hull of transgenic cotton

2009—2010年试验结果趋势一致，本文采用了2010年数据。数据采用DPS 6.55进行平均值和标准差运算，所有数据均为3次重复平均值，并采用最小显著差异法(LSD)进行差异显著性检验。

伸长期的棉纤维是棉铃虫主要取食对象，此期Bt蛋白的含量对抗虫性有一定影响;而成熟期的棉纤维中Bt蛋白成为残留物。从图4可以看出，随着棉纤维的生长发育，其中的Bt蛋白含量总体呈下降的趋势，至成熟期，Bt蛋白的含量极低。施氮方式对棉纤维中Bt蛋白含量的影响在不同生育阶段有所不同。随着氮肥前移，棉纤维伸长期的Bt蛋白含量呈上升趋势，至成熟期时，Bt蛋白含量呈下降的趋势。在伸长期，T2、T3和T4比T1处理的棉纤维Bt蛋白含量分别增加87.53%、96.96%和109.84%;至吐絮期，T2、T3和T4比T1处理的棉纤维Bt蛋白含量分别下降23.94%、26.85%和52.51%。方差分析表明，在伸长期，T1处理纤维中Bt蛋白表达量极显著低于其余3个处理;在加厚期，T3处理纤维中Bt蛋白含量极显著高于T4和T1处理;在成熟期，T1处理Bt蛋白的含量极显著高于T4处理。

幼叶是棉铃虫主要取食对象之一，其中的Bt蛋白含量与抗虫性能关系密切;而脱落老叶是Bt蛋白主要残留器官之一。由图1可见，随着棉花叶片的生长发育，Bt蛋白的含量呈现先上升后下降的趋势，在功能期时达到高峰，在衰老期和脱落期均呈现下降趋势。施氮方式对叶片中Bt蛋白含量有明显的影响。随着氮肥前移，展开期的叶片Bt蛋白含量有升高趋势，而衰老期和脱落期叶片Bt蛋白含量有降低的趋势。在展开期，T2、T3和T4比T1处理的叶片Bt蛋白含量分别增加339.18%、375.71%和651.42%。在脱落期，T2、T3和T4比T1处理的叶片Bt蛋白含量分别减少32.25%、56.14%和58.22%。方差分析表明，在叶片展开期，T4处理的Bt蛋白含量与其余3个处理的差异达到极显著水平;在叶片脱落期，T1处理的Bt蛋白残留量与其余3个处理的差异达到极显著水平。因此说，氮肥前移可以达到增加幼叶中Bt蛋白含量，减少老叶中Bt蛋白含量的目的。

图4 施氮方式对转基因抗虫棉棉纤维Bt蛋白含量的影响Fig.4 Effects of nitrogen fertilizer methods on the content of Bt insecticidal protein in fiber of transgenic cotton

2.3.3 施氮方式对抗虫棉棉子Bt蛋白含量的影响

成本管理是一门花钱的艺术，如何将每一分钱花得恰到好处、将企业每一种资源用到最需要它的地方，是企业在新的商业时代共同面临的难题。麦肯锡曾这样评价中国企业：成本优势的巨人，却是成本管理上的侏儒。企业尚且如此，更何况中国的公立医院，不少院长甚至连财务报表都看不懂，何谈成本管理？

图5 施氮方式对转基因抗虫棉棉子Bt蛋白含量的影响Fig.5 Effects of nitrogen fertilizer methods on the content of Bt insecticidal protein in seed of transgenic cotton

2.4 不同施氮方式下棉花Bt蛋白含量的比较

设置 4 个施氮方式(基肥:花铃肥:盖顶肥)处理，分别是:T1(0∶0.4∶0.6)，T2(0.2∶0.4∶0.4)，T3(0.4∶0.4∶0.2)，T4(0.6∶0.4∶0)。氮肥采用尿素，施氮总量为300 kg/hm2。随机区组设计，重复3次。每小区为7行，行宽1.2 m，行长9.0 m，小区面积为75.6 m2。供试品种为中棉所72，为转Bt+CpTI基因的抗虫杂交棉，由中国农业科学院棉花研究所提供。两年均在4月20日地膜覆盖直播，密度37500株/hm2。

棉铃虫主要取食棉花幼嫩器官，这些器官中Bt蛋白含量与抗虫性能关系密切。从表1可以看出，不同施氮方式对棉花幼嫩器官中Bt蛋白含量有明显影响。随着氮肥前移，幼嫩器官中Bt蛋白含量呈明显增加的趋势(T4处理的铃壳和棉子除外)。例如，T2比T1处理的叶片、棉蕾和铃壳、棉纤维、棉子中Bt蛋白含量分别增加 4.49、1.19、1.80、1.88、1.70 倍。不同施氮方式对叶片 Bt蛋白含量的影响更为明显，T2、T3、T4 分别比 T1处理增加4.49、4.76和7.51倍。说明氮素适度的前移有利于提高抗虫棉各器官的抗虫性能，尤其是叶片。

表1 不同施氮方式下棉花幼嫩器官中Bt蛋白含量的比值Table 1 Ratio of the content of Bt insecticidal protein in young cotton organs under different nitrogen fertilizer methods

2.4.2 不同施氮方式下棉花老熟器官Bt蛋白含量的比较

2.3.1 施氮方式对棉铃铃壳中Bt蛋白含量的影响

创造性叛逆指的是变异文学的一种变异形式，在文学作品翻译中的创造性翻译，不仅包括不同的语言形式以及句式结构的多重变化，也包括在文化层面的信息量的多样变化。在文学作品的翻译过程中，创造性叛逆不仅包括减词法、增词法、省略等，还包括阐释法，而翻译本身就具有阐释特性，是一种跨文化阐释的交际行为，既有语言转换功能，也有着跨文化意义上的阐释功能，这一特点更适合于对文学作品与理论著作的翻译。然而，阐释法并不是万能的，在运用阐释法所译出的译文也会有不准确的情况出现。因此，在翻译《孟子》的过程中必须要合理使用创造性叛逆阐释论，保证翻译文本的准确性。

Bt蛋白主要残留在棉花的老熟器官中。从表2可以看出，施氮方式对棉花老熟器官中Bt蛋白含量有明显影响。随着氮肥前移，老熟器官中Bt蛋白含量呈明显降低的趋势。例如，T3比T1处理的叶片、铃壳、棉纤维和棉子中Bt蛋白含量分别减少56%、7%、27%和28%。说明氮素适度的前移有利于减少棉花老熟器官的Bt蛋白含量。

表2 不同施氮方式下棉花老熟器官中Bt蛋白含量的比值Table 2 Ratio of the content of Bt insecticidal protein in overripe cotton organs under different nitrogen fertilizer methods

2.5 施氮方式对棉花产量的影响

从表3可以看出，施氮方式对棉花产量有明显影响。随着施氮前移，棉花总成铃数和铃重以及籽棉和皮棉产量有先增加趋势，T3处理达到最高，至T4处理又有所下降。其中，T2处理比T1处理的总成铃数、铃重和籽棉、皮棉产量分别增加4.72%、1.90%和6.80%、7.99%。T3处理比T1处理的总成铃数、铃重和籽棉、皮棉产量分别增加7.97%、2.94%和11.24%、12.01%。T4处理比 T1处理的总成铃数、铃重和籽棉、皮棉产量分别增加2.90%、2.42%和5.47%、6.02%。方差分析表明，T3处理的总成铃数和籽棉产量显著的高于其它3个处理，其铃重显著高于T1处理，皮棉产量显著高于T1和T4处理。说明从产量上看，氮肥前移或后移均不利于提高产量，底肥∶花铃肥∶盖顶肥为 0.4∶0.4∶0.2 有利于棉花高产。

表3 施氮方式对对抗虫棉产量及产量构成的影响Table 3 Effects of nitrogen fertilizer methods on yield and its components of transgenic cotton

3 结论与讨论

3.1 棉花不同器官Bt蛋白含量的比较

众多研究表明，抗虫棉不同器官中的Bt毒蛋白含量存在着明显的差异。王保民等［12］和沈平等［13］报道，叶片中的Bt毒蛋白含量远远高于蕾、花、铃。张永军等［14］报道，不同器官杀虫蛋白表达量顺序为叶＞铃、花心、花萼、蕾＞花瓣＞苞叶。本研究着重比较了抗虫棉幼嫩器官中Bt毒蛋白含量，结果表明，幼嫩器官的Bt蛋白含量总体表现为棉纤维＞叶片＞棉壳、蕾＞棉子(表4)，与前人研究结果基本一致。在棉铃膨大期，纤维的Bt蛋白含量最高，这对毒杀蛀食棉铃的棉铃虫较为有利;幼叶中Bt蛋白含量较高，也有利于棉铃虫的防治。

他家有一块地在对面的山巅之上。那里有着整条沟最深厚的黑土，光照时间充足，狗娃的父亲和兵子之前在那片地里种过黄豆和芝麻，收成很不错。但是，上山的路崎岖而陡峭，爬到山巅要耽误个把时辰的工夫。狗娃和兵子每次上山之前，都要带上一天的干粮和水，一直在地里劳作到太阳西下才下山回家。

表4 棉花不同幼嫩器官中Bt蛋白含量的比值Table 4 Ratio of the content of Bt insecticidal protein in different young cotton organs

抗虫棉叶片、脱落的蕾铃以及收获的絮铃是Bt蛋白的主要残留器官，它们一部分在生育期间直接掉落土壤，其中残留的Bt蛋白对环境可能形成污染，一部分作为收获产品，其中残留的Bt蛋白对人畜健康可能存在潜在风险。目前，对抗虫棉老熟器官的Bt蛋白含量研究较少。张顺等［7］研究了施氮量对棉花老熟器官Bt蛋白含量的影响，结果表明，棉子中Bt蛋白含量最大。本研究表明，棉花老熟器官中Bt蛋白的含量表现为棉子＞叶片＞铃壳＞棉纤维。不同施氮方式处理下棉花成熟棉子中Bt蛋白含量达737.67—1158.66 ng/g(图5)，是老熟叶片的 15.90—22.35 倍，是成熟铃壳的 30.50—47.48 倍，是成熟棉纤维的 48.49—68.37 倍(表 5)。尽管目前研究表明，棉子中Bt蛋白对食品生产无明显影响［15-17］，但仍缺少长期研究结果。因此，应进一步加强对抗虫棉棉子用于食品生产的安全性研究，以消除消费者的疑虑。本研究还表明，棉纤维中Bt蛋白残留量仅有10.79—22.72 ng/g(图 4)，对人类衣着较为安全。

表5 棉花不同老熟器官中Bt蛋白含量的比值Table 5 Ratio of the content of Bt insecticidal protein in different overripe cotton organs

3.2 施氮方式与棉花器官Bt蛋白含量

目前，施氮方式对抗虫棉器官Bt蛋白表达和残留的影响鲜有报道。本研究表明，施氮方式对棉花幼嫩和老熟器官中Bt蛋白含量均有明显影响。总体表现为随着氮肥前移，幼嫩器官中Bt蛋白含量呈明显增加的趋势，尤其是对叶片Bt蛋白含量影响更为明显。随着氮肥前移，棉花老熟器官中Bt蛋白含量则呈明显降低的趋势。说明氮肥适度前移有利于减少棉花老熟器官的Bt蛋白含量。本研究还表明，施氮方式对幼嫩器官中Bt蛋白含量的影响大于对老熟器官中Bt蛋白含量的影响。因此说，种植抗虫棉时，可通过氮肥适度前移，一方面，增加幼嫩器官中Bt蛋白含量，提高棉花的抗虫性能;另一方面，降低老熟器官中的Bt蛋白含量，减少对生态环境和人畜健康的潜在风险，缓解消费者对转基因产品安全性的担忧。

3.3 施氮方式与棉花产量

氮素运筹是调控作物生长发育的重要途径［18］。马宗斌等［19］在黄河流域进行棉花盆栽试验，设3个氮肥基施和追施比例(分别是2∶1、1∶1和 1∶2)。结果表明，基追比为 1∶2处理的皮棉产量分别比 1∶1和 2∶1处理增加3.66%和7.33%。Yang等［20］在长江流域试验将常规的施氮方法(氮肥300 kg/hm2，基肥∶开花期∶盛花期为30%∶40%∶30%)改变为施氮量225 kg/hm2，基肥∶开花期∶盛花期为0%∶40%∶60%。结果表明，后者可提高棉花生物量、收获指数和产量。本研究表明，棉花施氮量为300 kg/hm2，采用基肥∶花铃肥∶盖顶肥为0.4∶0.4∶0.2的施氮方式可获得最高产量，比其余3种施氮方式的籽棉产量和皮棉产量分别增加4.15%—11.24%和3.73%—12.01%。这一结果与马宗斌等［19］在黄河流域的试验结果接近，但与Yang等［20］在长江流域的试验结果不同，可能原因是长江流域较黄河流域生育期长，棉花生长期间温度高、雨量大，氮肥适当后移有利于提高产量，而在黄河流域棉区，氮肥后移可能会造成棉花减产，同时，还有可能减少幼嫩器官中Bt蛋白含量，降低棉花的抗虫性能，另一方面，提高老熟器官中Bt蛋白含量，增加对生态环境和人畜健康的风险。

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