栗颖华 ， 禹学礼 ，张德勋 ，陈君怡，许亚坤，李晓霞，昝林森

(1.河南科技大学 动物科技学院，河南 洛阳 471003；2.洛阳巨尔乳业有限公司，河南 洛阳471031；3.西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100)

GV期卵母细胞冷冻具有重要的科学意义和应用价值。在人类医学领域，GV期卵母细胞冷冻保存可以为放疗癌症患者、卵巢摘除患者保存生殖能力；在畜牧领域，未经成熟培养的GV期卵母细胞现场冷冻可以避免长时间运输对卵母细胞造成的不良影响，为胚胎生物技术研究提供充足的试验材料。目前，卵母细胞的冷冻效率非常低，且大多以MII期卵母细胞为冷冻对象，牛MII期卵母细胞经冷冻后再体外受精，囊胚率11%～25%[1]；而GV期卵母细胞对冷冻更敏感，一直被视为生物材料的“冷冻禁区”，直到近些年采用玻璃化冷冻才获得成功，冷冻后成熟率仅为19%～21%，囊胚率仅为1%～5%[2]。影响牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的因素众多，玻璃化冷冻液是最重要的影响因素之一。玻璃化冷冻液的特点是必须添加高浓度冷冻保护剂，冷冻中虽然高浓度冷冻保护剂可以降低冰晶的形成，从而减少冰晶对细胞的损伤[3]，但是也会因渗透压的变化[4]及冷冻保护剂的化学毒性[5-6]而对细胞造成损伤。因此，不同冷冻保护剂对细胞毒性、不同冷冻保护剂的配比是牛GV期卵母细胞冷冻的研究热点之一。

本文拟在相关研究的基础上，探索不同玻璃化冷冻液对牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes , COCs)冷冻后体外成熟及受精后发育能力的影响，从而检测常用的几种玻璃化冷冻液对卵母细胞的毒性，并筛选出最佳的牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻液。……