姜雪鸥，钟金城

(西南民族大学 动物遗传育种学国家民委-教育部重点实验室，四川 成都 610041)

动物线粒体基因组中通常含有2个rRNA、13个结构蛋白基因、22个tRNA和1个D-loop区[1]。按照母性遗传方式传代，其分子量小，拷贝数多，进化速度很快，碱基的替代率比单拷贝核DNA基因组快6～10倍。12SrRNA基因是在进化上比较保守，通常被用于系统发生和分子进化的研究[2]。

牦牛是牛属动物中唯一繁殖在青藏高原及其毗邻高寒牧区的牛种，一般生活在海拔3 000 m以上的高山、亚高山地区，对低氧、高寒等恶劣的环境具有很强的适应能力, 同时，该物种对于缺氧环境的适应能力具有很大的生态可塑性[3]。

本文以西藏11个牦牛品种为研究材料，首次对它们的mtDNA 12SrRNA基因全序列进行了测定及分析，并在11个群体内进行同源性比较和分子信息学的探讨，为今后深入研究牦牛线粒体基因的分子特征、种群结构等方面提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物及血样采集

从11个西藏牦牛品种或类群中，随机选取健康成年牦牛110头，采集耳组织，75%乙醇保存，低温带回实验室，-80 ℃保存(牦牛的品种及数量见表1)。

1.2 酶和试剂

Tris-Base、氯仿、95%酒精、DNA Marker 2000、蛋白酶K、EDTA、硼酸、IPTG、饱和酚、X-gal、氨卞青霉素、琼脂粉等均购自大连宝(TakaRa)生物工程有限公司；动物基因组DNA凝胶回收试剂盒购自天根生化科技有限公司。

1.3 菌株和载体

大肠杆菌DH5α由成都天泰生命科技有限公司提供；pMD19-T Vector载体购自大连宝(TakaRa)生物有限公司。

1.4 基因组DNA提取及检验

采用的是常规的酚-氯仿法提取动物组织的基因组DNA[4]，用1%～1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计法双重检测DNA的浓度和纯度，并将所提DNA产物置于-20 ℃保存备用。……