张 刚，曹丽群，谢毓滨，钟待鸣

（长沙市血液中心，湖南 长沙410001）

人类血小板同种抗原（human patelet alloantigens，HPA）位于血小板膜糖蛋白上，这些蛋白是由遗传决定的，HPA的基因频率在不同种族、不同区域中的分布是不同的，研究HPA的基因多态性不仅为人类学和遗传学等研究提供重要依据［1］。在临床血小板输血过程中，如果血小板同种抗原不相匹配，可导致受血者机体产生血小板同种抗体，引起同种免疫血小板减少综合症、输血后紫癜、血小板输注无效等［2］。通过对血小板基因分型的研究，可以有效避免血小板特异性免疫的发生，提供给需要输注血小板患者HPA基因型相匹配的血液制品，在临床输血应用中具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 样本 长沙市中心血站收集618名长沙地区汉族无偿血小板献血者EDTA抗凝血500μl。样本采用盐析法提取DNA用50μl的注射用水溶解，－20℃冷冻。

1.2 仪器设备 PCR扩增仪（PTC－200，USA），凝胶成像（Alpha），电泳装置（北京六一仪器厂）。

1.3 试剂 长春博德生物公司血小板抗原（HPA）基因分型试剂，Taq酶购自大连宝生物。

1.4 PCR扩增 将待检测样本DNA溶解，按说明书操作，每个PCR反应体积为10μl，包括1 μlDNA，8μl PCR－buffer。PCR反应体积10μl。按94℃，3min；94℃，30s、61℃，30s、72℃，50s；30个循环后72℃，5min；4℃循环参数扩增。

1.5 PCR产物检测 扩增结束后取PCR产物在2%的琼脂糖内电泳30min，结束电泳记录结果。内对照产物长度429bp。

2 结果

2.1 结果判定 根据有无PCR产物和产物大小是否和预计产物大小一致片段判断是否有血小板特异性产物。有特异性片段断定有特异性抗原，反之没有特异性抗原。

2.2 基因分型结果 长沙地区汉族618名血小板献血者血小板抗原基因检测结果是HPA－1aa 609人，HPA－1ab 9 人；……