何深知，邵建群，宫宁强，陈 敏，顾 微

（首都医科大学 化学生物学与药学院实验教学中心，北京 100069）

卵磷脂是一种含磷的极性脂类物质，由法国人Gobley于1846—1847年从脑和蛋黄中首先发现［1］，目前，它被誉为与蛋白质、维生素并列的 “第三营养素”。卵磷脂有极高的营养和医学价值，具有延缓衰老、提高大脑活力、治疗动脉硬化、解除心脑血管疾病、预防脂肪肝、润泽皮肤等多种生理功能，同时还具有很好的乳化作用和抗氧化性能［2］。因此，卵磷脂在食品、医药、化妆品等行业应用广泛［3］。

卵磷脂主要存在于大豆、蛋黄、菜籽、坚果、肉类、鱼类及动物内脏中［4］。卵磷脂主要包括蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂。蛋黄卵磷脂纯度高，其中含磷脂酰胆碱（PC）达78%，而大豆卵磷脂中只有16%；另外，蛋黄卵磷脂富含饱和脂肪酸，其氧化稳定性也优于大豆卵磷脂，对人而言，蛋黄卵磷脂比大豆卵磷脂更易被人体吸受，因此蛋黄卵磷脂的功能特性及应用开发现在正日益受到人们的关注［5］。

提取卵磷脂的方法主要有：有机溶剂萃取法、柱层析法、乙酰化法、高效液相色谱法、半透膜法、复合盐沉淀法以及超临界二氧化碳萃取法等［6］。用上述方法研究大豆卵磷脂的文献很多，方法成熟，而对蛋黄卵磷脂的研究起步较晚，其提取方法的研究特别是将其用于教学研究的文献相对较少。目前，蛋黄卵磷脂由于受到提取技术的限制，成功制取的量非常少，致使其价格相当昂贵，故市场上的卵磷脂多为大豆磷脂。因此，系统研究蛋黄卵磷脂的提取技术具有重要价值。

本文采用不同的有机溶剂，对蛋黄中的卵磷脂在不同的工艺条件下进行了提取，以期找到较合理的提取工艺条件。此外，本文还对不同的提取方法进行了比较，为最终廉价高效地提取蛋黄卵磷脂的工业化奠定基础实验数据。

1 实验

1.1 试剂与仪器

试剂：市售鲜鸡蛋，体积分数为95%的乙醇，无水乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，石油醚（北京现代东方精细化学品有限公司，AR）。

仪器：电子分析天平（TE212－L），赛多利斯科学仪器有限公司；循环水式多用真空泵（SHB－ⅢA），郑州长城科工贸有限公司；超声波清洗仪（KQ－500型），昆山市超声仪器有限公司。

1.2 卵磷脂的提取步骤

称取煮熟的鸡蛋黄并研磨，加入体积分数为95%的乙醇研细抽滤；滤渣再加入95%的乙醇研细抽滤，合并两次滤液，并转移至烧瓶中，蒸馏除去乙醇；残余物加少量无水乙醇，蒸发皿上蒸干，得到黄色油状物；冷却后加入氯仿使其完全溶解，再慢慢加入丙酮，即有卵磷脂析出。重复加入氯仿和丙酮的操作，最后得到较纯净的卵磷脂，并计算提取率。

1.3 探索提取工艺的实验设计

生物活性物质的提取效果受多种因素的影响，比如提取溶剂的种类、提取温度、溶液的pH値、浸泡时间，提取方式、提取次数、溶剂用量等［7］。考虑到卵磷脂不耐高温，在25℃时活性最强，高于50℃时，其中的不饱和脂肪酸极易氧化而失去生理活性；同时溶液的pH値也不宜使溶液呈碱性条件，因为在碱性环境中卵磷脂易发生分解，丧失生理活性［8］。所以，我们把提取温度定在25℃，溶液的pH値定在中性环境，然后在上述提取实验的基础上从溶剂种类、浸泡时间，提取方式、提取次数、溶剂用量5个方面进行对比实验，从而获得卵磷脂的最优提取条件。

2 结果与讨论

2.1 溶剂种类对卵磷脂提取率的影响

卵磷脂为两性分子，既有脂溶性，又具有亲水性。卵磷脂易溶于氯仿，可溶于乙醇、乙醚、甲醇、苯、石油醚等，不溶于丙酮。以往文献常选用95%的乙醇作为提取剂，再用氯仿和丙酮把卵磷脂分离出来［9］。由于乙醇溶解性好、廉价、无毒且可回收利用［10］，本文中也用它作为提取剂。氯仿作为溶剂毒性大，污染环境并危害操作者的健康，应以其他绿色溶剂替代。为此，选用两种较为安全的溶剂，即乙醚和石油醚，与氯仿进行对比实验，其他条件不变，实验结果见表1。

表1 3种溶剂提取率的对比

比较可知，除氯仿外，用乙醚分离得到的卵磷脂提取率较石油醚高，因此本文用乙醚代替氯仿。

2.2 浸泡时间对提取率的影响

抽滤前将蛋黄放在95%的乙醇中浸泡一下（下述的浸泡的含义同此），然后按上述的提取步骤提取，对比不同浸泡时间的提取率。选取15、30、60、120、240 min进行实验，其他条件不变。提取温度25℃；1次提取。结果如图1所示。

图1 浸泡时间对卵磷脂提取率的影响

从图1可以看出，在实验时间范围内，卵磷脂的提取率随着浸泡时间的增加而增加，可见延长浸泡时间有利于提高卵磷脂提取率。但考虑到教学课时及效率问题，将浸泡时间控制在40～60min范围内较为合适。

2.3 超声对提取率的影响

超声提取技术被誉为“中药和天然产物提取的技术革命”，利用超声波产生的强烈震动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌等特殊作用，破坏细胞壁，使溶剂易渗透到细胞中，加速天然活性成分的溶出［11］。实验中我们在浸泡的同时加上超声强化，弥补了传统有机溶剂浸泡提取法的不足。

抽滤前，浸泡时加超声进行实验，选取15、30、60 min进行实验，提取温度25℃，1次提取，其他条件不变。结果如图2。

图2 浸泡加超声时间对卵磷脂提取率的影响

从图2可看出，超声强化技术的采用明显提高了卵磷脂的提取率。单纯浸泡与浸泡加超声两种提取方式的提取率的比较见图3。从图3可知，加入超声技术提取的优越性是很明显的，尤其在30min左右时间段内，浸泡加超声比单纯浸泡的提取率提高了3.16个百分点。因此，只要条件允许，应采用浸泡加超声的提取方式。

图3 单纯浸泡与浸泡加超声提取率比较

2.4 1次浸泡与2次浸泡提取的提取率比较

在总提取时间、总溶剂量相同条件下，1次浸泡与2次浸泡的实验结果比较见图4。

图4 1次浸泡与2次浸泡提取率比较

从图4可看到，在总时间和总溶剂量相同的情况下，不论是单纯浸泡还是浸泡加超声，2次提取的效果均比1次提取的效果好。可以想见提取次数越多，提取率会越高。但是文献［12］中有数据指出，提取次数越多杂质也越多，影响产品的纯度，还会给后续步骤造成麻烦，因此，我们在未做多次提取的对比实验的情况下采用2次提取。

2.5 乙醇用量对提取率的影响

提取剂用量一定会对最终提取率产生影响。本文选取95%的乙醇的用量为60、80、100、120、140mL进行对比实验，结果如图5所示。浸泡时间60min，提取温度25℃，1次提取。

图5 乙醇用量对卵磷脂提取率的影响

从图5可看出，95%的乙醇用量在120mL（相当于1g蛋黄的乙醇用量为5mL）之内时提取率随乙醇用量增加的增势很强，之后趋平。因此，从提取和乙醇回收两方面考虑，1g蛋黄的乙醇用量为4～5mL为佳。

3 结论

综合以上实验数据，得到提取卵磷脂最佳工艺条件是：提取温度25℃；溶液的pH値为中性环境；以95%的乙醇作为提取剂，用乙醚和丙酮把卵磷脂分离出来；提取方式为浸泡加超声；提取次数为2次，每次15～20min；1g蛋黄的乙醇用量为4～5mL。上述方法主要考虑了教学需求，所以可为实验教学采用，亦可作为蛋黄卵磷脂工业化生产的数据参考。

4 结束语

传统的蛋黄卵磷脂的提取工艺的提取效率低，随着高新技术的日益成熟，利用高新技术与传统工艺结合将成为提取高纯度卵磷脂的新的手段。

进入21世纪以来，我国蛋黄卵磷脂的提取和应用取得了较大进展，但还未能从蛋黄中提取高纯度的食用、医药用卵磷脂。我国的卵磷脂生产就其生产规模、技术水平而言与国外相比还差距较大，仍需大量进口。卵磷脂的生产是当前国家重点支持的技术开发领域之一。将来还应对蛋黄卵磷脂的基础性质、功能做深入研究，探索其不同及优于大豆卵磷脂的特性，从而发展出适宜蛋黄卵磷脂的生产应用技术。随着高新技术的发展与应用，相信不久的将来，优质蛋黄卵磷脂产品将会得到更大规模的开发与更广泛的应用。

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［1］常皓，王二雷，宫新统，等.蛋黄卵磷脂研究概况［J］.食品工业科技，2010（5）：414－416.

［2］吴汉东，佟伟.蛋黄卵磷脂的提取方法研究［J］.食品工业，2010（2）：49－50.

［3］李扬，刘静波，林松毅.高纯度蛋黄卵磷脂提取技术研究［J］.食品科学，2006，27（12）：851－853.

［4］陈艳辉，韦月园，玉现新，等.乙醇提取鸭蛋黄卵磷脂的工艺研究［J］.广州化工，2011，39（9）：75－77.

［5］谭利伟，麻丽坤，赵进，等.蛋黄卵磷脂的应用研究进展［J］.中国家禽，2005，27（21）：35－36.

［6］吴汉东，佟伟.高纯度蛋黄卵磷脂的提取工艺研究［J］.安徽农业科学，2010，38（14）：7537－7538.

［7］臧荣鑫，蔡勇.卵黄卵磷脂提取纯化及纯度鉴定实验设计［J］.大学化学，2010，25（2）：46－48.

［8］高兆建，甄宗圆，贺稚非，等.蛋黄卵磷脂的分离提纯及鉴定研究［J］.肉类工业，2003（4）：15－18.

［9］曾慧慧，刘俊义.现代化学实验［M］.北京：北京大学医学出版社，2003.

［10］赵彬侠，张小里，卢荣，等.蛋黄卵磷脂的提纯工艺研究［J］.西北大学学报，2004，34（3）：297－300.

［11］肖虹，周裔彬，尚岩岩，等.超声辅助提取鸡蛋卵磷脂的工艺研究［J］.食品工业科技，2010，31（8）：255－257.

［12］尤秀丽，李仕原，陈茂林，等.从大豆粉末中提取卵磷脂的超声辅助萃取新工艺［J］.应用化工，2011，40（2）：252－254.