杨清，毕芳芳，刘冬玲

1.中国医科大学 附属盛京医院妇产科，辽宁 沈阳 110004；2.北京市大兴区红星医院 妇产科，北京 100076

子宫内膜癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤之一，近年来发病率不断上升，与许多因素有关，如遗传、体质因素、长期雌激素刺激等，但其发生的分子机制尚不清楚[1-2]。近期研究表明，子宫内膜间质和腺上皮细胞合成和表达的胰岛素样生长因子（in⁃sulin-like growth factor，IGF）家族可能在类固醇激素的作用下参与子宫内膜的增生和分化改变，调节癌变过程[3]。IGF-ⅡmRNA结合蛋白Ⅲ（IGF-ⅡmRNA-binding proteinⅢ，IMP-3）是 IGF-Ⅱ mRNA结合蛋白家族的主要成员（其家族还包括IMP-1和IMP-2），与其他2个成员的功能不同且与多种肿瘤的发生关系最为密切。正常情况下，IMP-3主要在胚胎时期表达，在正常成人组织中的表达极少或已不存在[4]。1996年，IMP-3基因首先在胰腺癌中被发现。研究表明，在多种肿瘤如胰腺癌、宫颈癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等中可检测到高水平的IMP-3[5-8]，因此IMP-3被认为是一种癌胚蛋白，与肿瘤的发生有关[9]，但其在子宫内膜病变发生过程中的作用机制尚不清楚。我们检测了正常子宫内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌组织中IMP-3的表达变化，期待能为子宫内膜癌癌变过程中的生化改变提供新的启示，为临床子宫内膜癌的早期诊断和治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本采集和处理

收集中国医科大学附属盛京医院2005～2008年经手术病理证实的子宫内膜腺癌标本40例，年龄35～65岁，平均42±0.7岁；非典型增生10例（由于本实验预研究的指标为非雌激素依赖性因子，故标本选取30～60岁不同年龄段患者手术病理标本），平均年龄41±0.3岁；选取同期因子宫颈上皮非典型增生（CIN）Ⅲ切除子宫的正常增殖期子宫内膜组织20例为对照组，年龄33～58岁，平均40±0.8岁；3组患者年龄无统计学差异。所有标本均经病理检查确诊，所有患者术前均未接受放疗、化疗或激素治疗。

子宫内膜癌组按国际妇产科联盟（FIGO）2009年标准进行手术病理分期：Ⅰ期17例，Ⅱ期6例，Ⅲ期17例；组织学病理分级按世界卫生组织（WHO）标准：高分化组18例，中分化组12例，低分化组10例。

1.2 实验试剂

兔抗人IMP-3单克隆抗体、多克隆羊抗兔SP二抗试剂盒和DAB显色试剂盒购自北京博奥森公司。

1.3 免疫组化实验方法

常规甲醛固定，石蜡包埋4 μm连续切片；脱蜡水化后行热抗原修复，根据试剂盒说明行SP法免疫组化染色，DAB显色；用已知的IMP-3阳性的乳腺癌组织为阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。

首先用光电显微镜（Olympus BX50）低倍镜（×100）观察整个切片，然后随机选取5个高倍视野（×400）照相。双盲阅片，结果分析时首先计数每个视野中的阳性细胞数，并计算阳性率，然后用图像分析仪对视野中的阳性细胞百分面积及强度进行检测，得出平均光密度值（IOD），以IOD值表示IMP-3蛋白的相对表达量。

1.4 统计学分析

所有数据均用SPSS16.0软件进行统计学处理，计量资料以x±s表示，计数资料用率表示，两组率的比较用卡方检验，两组均数间比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IMP-3在正常子宫内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌组织中的表达

免疫组化染色结果显示IMP-3定位于胞浆，在正常子宫内膜中IMP-3几乎不着色，在非典型增生子宫内膜中呈黄色，而在子宫内膜癌组织中胞浆呈棕黄色（图1）。IMP-3在正常子宫内膜中的阳性率为15%，相对表达量为5.361±1.074；在非典型增生组织中阳性率为60%，相对表达量为13.587±2.301；在子宫内膜癌组织中阳性率为80%，相对表达量为19.572±1.936。IMP-3在子宫内膜癌组织中的表达明显高于非典型增生及正常内膜组织，在非典型增生组织中的表达量明显高于正常内膜组织，经卡方检验，差异有显著性（χ2=23.23，P＜0.05）（图2）。

2.2 IMP-3的表达与子宫内膜癌手术病理分期及病理分级的关系

在子宫内膜腺癌组织中，Ⅰ期腺癌与Ⅱ、Ⅲ期的IMP-3 mRNA和蛋白的相对表达量均有显著性差异（P＜0.05），而Ⅱ、Ⅲ期相比差别不明显（P＞0.05）。在不同组织学分级的子宫内膜癌中，G1组分别与G2和G3组相比，IMP-3的mRNA和蛋白相对表达量均有显著性差异（P＜0.05），而G2和G3组相比差别无统计学意义。＜1/2肌层浸润组和≥1/2肌层浸润组相比，mRNA和蛋白相对表达量均有显著性差异（P＜0.05），有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的差异不明显（P＞0.05）。参见表1。

3 讨论

子宫内膜癌作为严重威胁妇女生命健康的恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势，且其发生机制目前尚不明确，可能与多种因素有关[2]。许多研究表明，信号传导通路在内膜癌的发生、发展中发挥重要作用。其中，PI3K/AKT及RAS/MAPK信号通路是膜受体信号向细胞内传导的重要途径，它们均可被多种细胞外信号激活，参与细胞增殖、分化的调节及细胞凋亡，与内膜癌的发生关系密切[10-11]。

图1 IMP-3在不同病变子宫内膜组织中的表达（SP，×100）

图2 IMP-3在不同病变子宫内膜组织中的相对表达量

表1 IMP-3在子宫内膜癌中的表达与手术分期和病理分级之间的关系

IMP-3是IGF-Ⅱ mRNA结合蛋白家族的主要成员[9]，相对分子质量约64×103，由580个氨基酸残基组成。IMP-3主要在胚胎时期表达，在正常成人组织中表达非常少或已不存在，主要参与胚胎形成时期多种生物学过程，如转录调节、翻译控制等[4]。在多种肿瘤如胰腺癌、软组织癌、结肠癌、横纹肌肉瘤及非白血性白血病细胞系中可检测到高水平表达的IMP-3 mRNA，因此IMP-3被认为是一种癌胚蛋白，与肿瘤发生有关，可能作为潜在的诊断或预后分子标志物[5-9]。有研究表明，214例乳腺浸润性导管癌中，IMP-3阳性表达31例，并有研究提示IMP-3与乳腺癌的进展和恶性度相关，可能作为三阴性乳腺癌的一个辅助诊断指标[10]。但IMP-3作为诊断肝癌的标志物的特异性和敏感性偏低[8]。在癌症发生过程中，IMP-3作用于IGF-Ⅱ，激活PI3K/AKT及RAS/MAPK通路，细胞间黏附降低、细胞游走性增加，促进细胞外基质降解，肿瘤转移增加[4]。

我们在正常子宫内膜组织、非典型增生内膜组织、内膜癌组织中检测了IMP-3的表达。结果显示，子宫内膜癌组织中IMP-3表达的阳性率达80%，明显高于正常子宫内膜组织及非典型增生内膜组织，其中Ⅰ期癌组织中表达水平较低，而在Ⅱ、Ⅲ期表达水平增高，说明IMP-3可能在子宫内膜癌发生过程的中晚期起重要作用。在不同分级的癌组织中，分化程度越低，IMP-3表达水平越高，说明IMP-3可能与肿瘤的转移和游走有关。

本实验初步证实IMP-3在子宫内膜癌中高表达，在子宫内膜癌早期发展过程中发挥癌基因的作用，但其具体作用机制还需要进一步研究。

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