郝锋

GP73联合AFP、VEGF检测对原发性肝癌的诊断意义

郝锋

目的探讨高尔基体糖蛋白73(GP73)、甲胎蛋白(AFP)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)联合检测对原发性肝癌的诊断意义。方法用化学发光免疫分析法、ELISA法和全自动生化分析仪分别检测100例原发性肝癌和50例健康对照患者GP73、AFP和VEGF含量，分析GP73联合AFP、VEGF检测对原发性肝癌的诊断意义。结果健康对照组GP73、AFP和VEGF含量明显低于原发性肝癌组，差异有统计学意义(P<0.05)；单独检测GP73、AFP和VEGF对诊断原发性肝癌的特异性分别为93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分别为62.5%、67.2%、72.3%，联合检测GP73、AFP和VEGF可提高诊断原发性肝癌的特异性和敏感性，分别为100%和98.9%，单项检测的特异性和敏感性高于联合检测(P<0.05)。结论联合检测GP73、AFP和VEGF作为诊断原发性肝癌的重要指标，可提高原发性肝癌的诊断价值。

GP73；AFP；VEGF；原发性肝癌

原发性肝癌(HCC)是一种严重威胁人类健康与生命的疾病，其发病的主要危险因素是肝炎病毒感染[1]。近年来，大量文献报道GP73可能成为肝癌诊断的重要标志物[2]，但联合检测GP73、AFP和VEGF诊断HCC的报道较少。本次研究联合检测HCC患者血清中GP73、AFP和VEGF，同时同步检测50例健康对照组的GP73、AFP和VEGF，并进行对比分析，从而探讨GP73、AFP和VEGF对HCC的诊断价值，总结报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2011年6月至2012年11月收治的100例原发性肝癌患者为研究对象，其中男65例，女35例，年龄18～70岁，平均(38±9.6)岁；根据临床表现、CT、B超、AFP定量等确诊，部分病例经MRI和病理切片进一步诊断。对照组50例，男30例，女20例，年龄21～71岁，平均(39±10.6)岁，均为同期健康体检者。 两组患者的一般资料(年龄、性别等)差异无统计学意义，P<0.05。

1.2材料

1.2.1仪器 AXSYMPLUS(美国雅培)全自动化学发光分析仪、奥地利HT2型酶标仪。试剂：GP73 测定试剂盒购自碧云天生物公司；AFP测定试剂盒为AXSYM全自动免疫分析仪配套原装进口试剂；VEGF测定试剂盒购自晶美生物医学技术有限公司。

1.2.2标本采集 原发性肝癌组：空腹抽取静脉血2 ml，离心3000rpm/min，分离血清，置-20℃冰箱保存用于检测GP73、VEGF，其余用于AFP检测。健康对照组：早晨空腹抽取静脉血2 ml，3000rpm/min离心分离血清检测GP73、AFP和VEGF。

1.2.3方法 GP73蛋白含量测定采用Western印迹；AFP检测采用全自动电化学发光免疫分析仪；VEGF检测采用ELISA法。

2 结果

2.1两组血清GP73、AFP和VEGF水平变化 结果显示健康对照组GP73、AFP和VEGF含量明显低于原发性肝癌组，差异有统计学意义(P<0.05)。具体结果见表1。

表1 两组GP73、AFP和VEGF水平变化

2.2各肿瘤标志物单项和联合检测的特异性及敏感性 单独检测GP73、AFP和VEGF对诊断原发性肝癌的特异性分别为93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分别为62.5%、67.2%、72.3%，联合检测GP73、AFP和VEGF可提高诊断原发性肝癌的特异性和敏感性，分别为100%和98.9%，单项检测的特异性和敏感性高于联合检测(P<0.05)。具体结果见表2。

表2 GP73、AFP和VEGF对原发性肝癌的诊断价值(%)

3 讨论

近年来，血清肿瘤标志物越来越广泛的应用于肿瘤患者的检测，作为一种无创性诊断，同步检测多项标志物可使阳性诊断率提高，并能早期及时诊断[3]。Kladney等[4]人从巨细胞肝炎患者中筛选出GP73，它是一种跨膜糖蛋白，属高尔基体Ⅱ型，全长3042 bp，基因位于9号染色体长臂，定位于高尔基体顺面，内含1个开放阅读框，大小为1200 bp，可进行400个氨基酸的编码，包括胞外、跨膜和胞内3个区域，胞外段为N-末端，是发挥作用的主要功能区。因在WB上相对分子质量显示为7300而得名，又称GOLM1或GOLPH2。

AFP是一种糖原蛋白，目前人们公认血清AFP的检测是诊断HCC的重要手段。在哺乳动物胚胎期AFP由卵黄囊细胞和肝脏实质细胞、胃肠道黏膜细胞合成。AFP是检测原发性肝癌的特异性生化指标，可大大提高肝癌的诊断准确率。AFP由HCC患者的肝癌细胞产生和分泌[5]，先渗入癌周围组织再进入血液循环，AFP在血液中特异性强且含量极稳定。由于胚胎来源AFP与人肝脏和人血清来源的AFP之间存在大量共同的免疫和生化特征，因此，AFP阳性患者极易与其他妊娠、慢性肝病或肿瘤发生重叠现象，所以寻找具有互补诊断意义且特异性强的检测指标显得更为重要。AFP近30%～40%为阴性，阳性检出率为60%～70%，同时也常发现假阳性，如肝硬化、慢性肝炎、胚胎癌、胃癌等都伴有AFP一过性增高，从一定程度上使原发性肝癌的诊断更为困难。

多种血管内皮细胞增生因子由肿瘤细胞产生和分泌，其中作用最强的是VEGF，它是体内重要的血管生成和内皮细胞分裂的促进因子，肿瘤预后及转移复发和VEGF的高表达密切相关[6]。Torimura等[7]用原位杂交技术及免疫组化显示：正常肝组织内VEGF mRNA及蛋白的表达比肝癌组织低很多，肿瘤患者的VEGF与血管的分化程度密切相关。在肝癌形成过程中，多种细胞生长因子和生长因子，可促进VEGF的表达并结合其特异性受体(VEGFR)，从而充分发挥生物学功能，当发生肝癌后，会破坏血管生成抑制因子和血管生成因子调控的稳定作用，使肝癌细胞的免疫应答受到严重影响机体。

有研究表明，GP73蛋白的表达在肝癌患者的肝组织中显著升高，且与广泛的纤维化程度和肝脏炎症一致，它是一个颇具潜力的、新的肿瘤标志物，与肿瘤的产生过程、预后和转移密切相关。为使肝癌患者诊断的阳性率提高，许多学者认为血清肿瘤标志物联合检测对肝癌患者的诊断有明显的提高作用[8]。本次对100例原发性肝癌患者进行GP73、AFP和VEGF等肿瘤标志物检测发现，健康对照组GP73、AFP和VEGF含量明显低于原发性肝癌组，差异有统计学意义(P<0.05)。单独检测GP73、AFP和VEGF对诊断原发性肝癌的特异性分别为93.2%、95.6%和92.3%，敏感性分别为62.5%、67.2%、72.3%，联合检测GP73、AFP和VEGF可提高诊断原发性肝癌的特异性和敏感性，分别为100%和98.9%，单项检测的特异性和敏感性高于联合检测(P<0.05)。

总之，血清肿瘤标志物均具有广谱性，诊断HCC时缺乏高度的特异性，进行单项检测时，易弃漏阳性患者，阳性率不高，而联合检测三项肿瘤标志物时，阳性率达98.9%。联合检测GP73、AFP和VEGF作为诊断原发性肝癌的重要指标，可互为印证，互为补充，从而提高原发性肝癌的诊断率。

[1] 马桂英，刘 娟，姚红昌，等.多种肿瘤标志物对原发性肝癌的诊断价值.临床内科杂志，2001，18(2)：147-149.

[2] 王 洋，余 宪，张 旭，等.AFP、AFU、GGT、ALP联合检测对原发性肝癌的诊断价值.实用肿瘤学杂志，2003，10(1)： 23-24.

[3] Wright LM， Huster D， Lutsenko S， et al. Hepatocyte GP73 expression in Wilson disease. J Hepatol，2009，51：557-564.

[4] Kladney KD， Bulla GA， Guo L， et al. GP73，a novel Golgilocalized protein upregulated by viral infegtion.Gene，2000，249：53-65.

[5] Marrero JA， Romano PR， Nikolaeva O， et al. GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma. J Hepatol，2005，43：1007-1012.

[6] 毛一雷，杨华瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清标记物GP73在肝癌诊断中的初步研究.中华医学杂志，2008，88(14)：948-951.

[7] Cabibbo G， Craxi A. Epidemiology,risk factors and surveillance of hepatocellular carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci，2010，14(4)：352-355.

[8] 赵发林，候艳，李康.临床试验评价的ROC分析方法.中国卫生统计，2007，24(4)：349-35 1.

GP73jointAFP,VEGFdiagnosticsignificanceofthedetectionofprimarylivercancer

HAOFeng.

DepartmentofBloodTransfusion,FirstPeople’sHospitalofShangqiuCity,Shangqiu, 476000,China

ObjectiveTo explore the Golgi glycoprotein 73 (of GP73), alpha-fetoprotein (AFP) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and diagnostic significance of combined detection of primary liver cancer.MethodsChemiluminescence immunoassay, ELISA and automatic biochemical analyzer were used to detecte 100 cases of primary liver cancer and 50 healthy control patients of GP73, AFP and VEGF content GP73 joint AFP, VEGF detection of primary liver cancer the diagnostic significance.ResultsThe healthy control group of GP73, AFP and VEGF content was significantly lower than primary liver cancer group, the difference was statistically significant (P<0.05),separate detection of GP73 specificity of AFP and VEGF in the diagnosis of primary liver cancer 93.2%, 95.6% and 92.3%, sensitivity of 62.5%, 67.2%, 72.3%, the joint detection GP73, AFP and VEGF may improve the specificity and sensitivity for the diagnosis of primary liver cancer, respectively, 100% and 98.9 %, the specificity and sensitivity of the individual tests is higher than the joint detection (P<0.05).ConclusionThe combined detection of GP73, AFP and VEGF as an important indicator for the diagnosis of primary liver cancer, can improve the diagnostic value of primary liver cancer.

GP73；AFP；VEGF；Primary liver cancer

476000 河南省商丘市第一人民医院输血科