白玉香，苏 兴

(1.天津达仁堂京万红药业有限公司，天津 300112;2.天津和泽干细胞科技有限公司，天津 300308)

京万红软膏由地榆、地黄、冰片、血竭、乳香、没药等30余味中药制成，具有消肿活血，解毒止痛，去腐生肌的功效。用于治疗轻度水、火烫伤，疮疡肿痛，创面溃烂等。该药原质量标准收载在卫生部《药品标准中药成方制剂第十六册》中，原标准中含量测定项为填充柱法测定冰片含量，使用三氯甲烷作溶剂提取测定，该溶剂有毒性。为提高该制剂质量标准的可控性，本试验采用气相色谱法测定方中龙脑的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

仪器:Agilent 6890N气相色谱仪，ChemStation工作站，检测器为FID，载气为氮气。色谱柱:HP－INNOWAX(30 m ×0.53 mm，1 μm)。乙酸乙酯(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)。龙脑对照品(中国药品生物制品检定所，批号110881－200706，供含量测定用)，京万红软膏(天津达仁堂京万红药业有限公司，批号 211761、211762、211763)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 聚乙二醇20000(PEG－20M)为固定相的毛细管柱(30 m ×0.53 mm，1 μm)，柱温为 155℃。理论板数按正十八烷峰计算不低于10 000。

2.2 提取条件的考查 原标准中使用三氯甲烷作溶剂提取测定。三氯甲烷是一种神经毒、肝毒和肾毒物。主要引起中枢神经系统麻醉，肝和肾细胞坏死，对皮肤黏膜有刺激作用，可诱发细胞突变，具有高度的胚胎毒性和潜在的致畸性［1］。另外，样品中基质——蜂蜡等易溶于其中，污染色谱柱，故改用乙酸乙酯作为提取溶剂，两种溶剂提取结果比较，三氯甲烷溶解度高，乙酸乙酯提取液浑浊。因此，实验中采用两种溶剂进行了对比。

取本品约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入每1 ml含正十八烷0.25 mg的内标溶液20 ml(溶剂分别为三氯甲烷、乙酸乙酯)，密塞，摇匀，滤过，取续滤液测定，对比试验结果表明，二者对含量测定的结果无影响(RSD为0.05%)，故选用乙酸乙酯作为提取溶剂，见表1。

表1 提取溶剂考查(n=2)

2.3 溶液的制备

2.3.1 内标溶液的制备 取正十八烷适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 ml含0.25 mg的溶液，即得。

2.3.2 对照品溶液的制备 取龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶液制成每1 ml含0.3 mg的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品适量(相当于含龙脑约6 mg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20 ml，密塞，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.3.4 阴性样品溶液的制备 取缺龙脑的阴性供试品，再按“2.3.3”供试品溶液制备方法，制成阴性样品溶液。结果显示，阴性样品无干扰。见图1。

2.4 标准曲线的制备 取龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶液(0.253 06 mg/ml)制成每 1 ml含1.0052 mg的溶液，分别精密吸取1、2、3、5 和 10 ml至10 ml量瓶中，加内标溶液(0.253 06 mg/ml)至刻度，摇匀，精密量取1 μl，注入气相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析，测定各自峰面积，以龙脑对照品进样量(μg)为横坐标，龙脑与正十八烷峰面积的比值为纵坐标，求得回归方程:Y=3.522 X+0.0189(r=0.999 9)。结果表明龙脑进样量在0.100 52～1.0052 μg范围内线性良好。

图1 对照品(A)样品(B)阴性样品(C)气相色谱图

2.5 进样精密度试验 取同一批号(批号211761)样品适量(折合成龙脑约6 mg)，取1份，精密称定，按照“2.3.3”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测得样品中龙脑含量为6.1282 mg/g，RSD 为 0.21%，符合要求。

2.6 重复性试验 取同一批号(批号211761)样品适量(折合成龙脑约6 mg)，取6份，精密称定，按照“2.3.3”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，测定样品中龙脑含量。结果样品中龙脑平均含量为6.1041 mg/g，RSD 为1.14%，重复性良好。

2.7 稳定性试验 此项试验采用每隔2 h测定一次的方式进行试验。取同一批号(批号211761)样品适量(折合成龙脑约6 mg)，取1份，精密称定，按照“2.3.3”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，分别在0、2、4、6、8 及10 h测定样品中龙脑含量，结果分别为 6.1365、6.1084、6.1365、6.1212、6.1225及6.1442 mg/g，RSD 为 0.21%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.8 回收率试验 取同一批号(批号211761)样品适量(折合成龙脑约3 mg)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入每1 ml含龙脑0.149 64 mg的内标溶液(0.253 06 mg/ml)20 ml，再按“2.3.3”项下供试品溶液制备操作，制得供回收用供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，计算回收率。结果龙脑平均回收率为100.12%，RSD 为2.01%，结果见表2，医生能及时知道病人所用的是何种药物以便进行抢救，双盲试验应为每一个编盲号设置一份应急信件。其信封上印有药物临床试验的名称、药品编号和遇紧急情况下揭盲的规定，信件内容包括该编号的受试者所分入的组别及所放置的具体的药物名称，不良事件发生后拆阅时应记录的处理方法、采用药品的名称、抢救科室、主要负责人及应立即报告的单位、地址和联系电话等。应急信封应密封，随相应编号的临床研究用药物发往各临床试验中心，由该中心负责保存，非必要时不得拆阅，如果拆阅，需注明拆阅者、中心负责人或临床药理基地负责人、拆阅日期、原因等，并在病例报告表中记录。试验结束后应急信件应退还申办单位［6］。

采用计算机系统进行试验药品的管理，通常采用硬质泡沫塑料衬垫包装，外面采用条形码标签，临床试验药品所含有盲法试验的特殊信息，打印到每一个试验药品的标签上并储存在计算机里，以达到真正的盲法试验目的［8］。

中药安慰剂的制作是临床试验用药品的难点，对于儿童临床试验，安慰剂对照的设计不但要从科学性、伦理性方面考虑，还应从安慰剂制作水准方面加以考虑，以保证试验结果的可信性。随着国家加大对中药安慰剂研制的力度及计算机系统的应用，将为儿科药物研发逐步与国际接轨提供有力的支持。

1 张慧芝.安慰剂在医学中的应用［J］.药物研究，2006，3(5):58

2 王雪峰，董丹，刘芳，等.中药临床试验研究安慰剂制作初探［J］.辽宁中医杂志，2003，30(12):966

3 唐旭东，卞立群，高蕊，等.中药临床试验安慰剂制作探讨［J］.中国中西医结合杂志，2009，29(7):656

4 GB2760—2011.食品添加剂使用标准［S］.

5 关德祺，丁安伟.中药临床试验对照使用的安慰剂生产工艺质量标准的研究［D］.南京:南京中医药大学.2006:43－46

6 郑筱萸.中药新药临床研究指导原则(试行)［M］.中国医药科技出版社，2002:9－11

7 王国芳，谢琪，王晓菲.双盲双模拟临床试验的药物准备及编盲［J］.中药新药与临床药理，2005，16(4):308

8 Schneider R，Bagby J，Carlson R.Bar－code medication administration:a systems perspective［J］.Am J Health Syst Pharm，2008，65(23):2216