丝叶唐松草镇静催眠作用实验研究
2013-10-17郑冰清王升启胡晶红王光峰张永清
郑冰清 王升启 胡晶红 王光峰 张永清
1.山东中医药大学,山东济南 250355;2.中国军事医学科学院,北京 100850;3.沂源仁和堂中医诊所,山东沂源 256100
失眠是一种睡眠障碍性疾病,是多种躯体、精神和行为疾病所具有的常见临床表现,严重影响着人们身心健康、生活质量和工作效率。随着社会生活节奏的逐步加快,越来越多的人受到失眠困扰,据统计,全球约有27%的人存在失眠问题[1]。目前临床上常用的治疗药物主要是苯二氮卓类化合物等,虽然镇静催眠作用良好,但其副作用大且易产生依赖性[2]。中医药自古以来就是治疗失眠的有效方法[3-5],治疗手段包括针灸、推拿及中药等[6-10]。利用中药治疗失眠,具有疗效确切、副作用小的优势,所以近年来试图从应用历史悠久、资源丰富、毒副作用小的中草药中寻找更加安全有效的治疗药物,已经成为该领域的研究热点之一[11-14]。丝叶唐松草(Thalictrum foeniculaceum Bunge)为毛茛科唐松草属多年生草本植物,在山东章丘、博山、沂源一带有分布,长期以来当地药农认为其功能养心安神,内服其全草治疗各种失眠临床疗效确切。为充分开发利用丝叶唐松草植物资源,本研究对其进行了植物学、生药学、化学等方面的系统研究。本文是其药理学研究的部分内容,开展了全草粉末、醇与水提取物镇静催眠作用的行为学实验,以确定是否具有镇静催眠活性,为开发利用新的药用植物资源提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器
小鼠自主活动程序自动控制仪(中国医学科学院药物研究所研制);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 实验动物
SPF级ICR小鼠,体重18~22 g,雄性。由解放军医学科学院动物中心提供。动物合格证号:SCXK-(军)2007-004。实验前饲养2 d。室温24℃,相对湿度45%。光照12 h,自由摄食、饮水。
1.3 药品
丝叶唐松草药材:采集于山东省沂源县石桥乡大泉庄,经山东中医药大学李建秀教授鉴定,确认为毛茛科唐松草属植物丝叶唐松草(Thalictrum foeniculaceum Bunge)干燥地上全草。戊巴比妥钠:Sigma公司,批号:69020100。地西泮:天津力胜制药股份有限公司,批号:1009008。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 供试样品制备 精密称取丝叶唐松草全草88.61 g两份,剪碎,分别以10倍体积的95%乙醇和蒸馏水加热回流提取3次,每次2 h,合并3次提取液并减压浓缩、干燥,得醇溶性提取物(27.60%)和水溶性提取物(39.67%)。
2.1.2 小鼠镇静催眠实验 将50只ICR小鼠,随机分为5组,每组10只,按照表1设计的分组和剂量灌胃给药,每日1次,连续给药。①小鼠自主活动测试:各组小鼠于第7天给药1 h后,按照标号分别将小鼠放入自主活动仪中,适应3 min后,开始记录5 min内自主活动次数。②阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡率实验:各组小鼠于第10天给药1 h后,腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥钠,同时开始计时,以翻正反射消失记为小鼠进入睡眠,观察30 min内小鼠的入睡率。③阈上剂量戊巴比妥钠小鼠延长睡眠实验:各组小鼠于第10天给药1 h后,腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥钠,同时开始计时,以翻正反射消失1 min以上记为睡眠开始时间,以第一次恢复翻正反射时间记为睡眠结束时间,记录小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间[15]。
表1 正常小鼠实验给药方案
2.1.3 统计学方法 采用统计软件SPSS 16.0对实验数据进行分析,计量资料数据以均数±标准差(±s)表示,采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示,采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2.2 结果
2.2.1 对小鼠自主活动的影响 不同用药组小鼠5 min内自主活动次数见表2。表2结果显示,相对于对照组,地西泮组和丝叶唐松草乙醇提取物组小鼠自主活动次数有明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);丝叶唐松草粉末组与水提取物组小鼠自主活动次数稍有减少,但差异无统计学意义(P > 0.05)。
表2 对小鼠自主活动次数的影响
2.2.2 对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠入睡情况的影响 阈下剂量戊巴比妥钠不同用药组小鼠在30 min内的入睡只数及入睡率见表3。表3结果显示,对照组小鼠入睡2只,入睡率为10%,地西泮组小鼠入睡10只,入睡率达100%,丝叶唐松草粉末组与乙醇提取物组仅入睡2只,入睡率为20%,丝叶唐松草水提取物组入睡4只,入睡率为40%,对照组与丝叶唐松草用药组均显著低于地西泮组。
表3 阈下剂量戊巴比妥钠不同用药组小鼠入睡情况
2.2.3 对阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响 经实验,阈上剂量戊巴比妥钠不同用药组小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间见表4。表4结果显示:在阈上剂量戊巴比妥钠状况下,除丝叶唐松草乙醇提取物组外,其他用药组的小鼠睡眠潜伏期均比对照组有所缩短,以阳性药地西泮组效果最好,但与对照组比较,差异仍无统计学意义(P>0.05),说明各用药组缩短睡眠潜伏期的效果均不明显;与对照组比较,地西泮组和丝叶唐松草乙醇提取物组均显示有延长睡眠时间的效果,且差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),粉末组和水提取物组也能延长睡眠时间,但差异无统计学意义(P > 0.05)。
表4 阈上剂量戊巴比妥钠不同用药组小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间(min,±s)
表4 阈上剂量戊巴比妥钠不同用药组小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间(min,±s)
注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
组别 动物只数(只) 睡眠潜伏期 睡眠时间对照组地西泮组丝叶唐松草粉末组丝叶唐松草乙醇提取物组丝叶唐松草水提取物组10 10 10 10 10 4.64±2.75 3.77±0.98 4.46±1.30 5.27±2.74 4.45±1.07 48.09±6.95 105.93±13.91**66.88±23.34 94.14±33.87*57.59±28.56
3 讨论
丝叶唐松草为近年发现的山东新纪录种,有着较为广泛的分布,长期以来在民间用于治疗失眠疗效显著,部分长期失眠患者服药1~2个月即可痊愈。本研究结果显示,丝叶唐松草粉末、水提取物、乙醇提取物均显示有一定的镇静催眠作用,其中乙醇提取物使小鼠自主活动次数明显减少(P<0.05),使阈上剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠时间明显延长(P<0.05),但粉末及水提物的作用差异无统计学意义(P>0.05)。导致失眠的原因非常复杂,根据病因可将失眠划分为不同的类型[16]。就目前的研究结果来看,丝叶唐松草镇静催眠药理作用与实际临床治疗效果有着较大差距,究竟是其确实没有镇静催眠作用,还是由于剂量不当及现有实验模型未能与失眠发病机制相适应所导致,尚有待深入研究。
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