郑冰婷 董泓宏 张树辉

温州医科大学医学检验专业2010级 浙江温州 325035

生长曲线是细菌在液体培养基中的生长规律的曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图所得到的曲线［1-3］。典型生长曲线可分为迟缓期、指数生长期、稳定期和衰亡期，因此，本实验所做12h内的嗜热链球菌的生长曲线仅包括其迟缓期和指数生长期。测定微生物生长曲线有多种方法，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法。本实验结合涂布平板法和比浊法，先绘制吸光度与活菌数对数值的关系曲线，再结合该曲线所测各时间段的吸光度值对应一个活菌数的对数值，绘制得该菌的生长曲线。

1 实验

1.1 仪器与材料:①仪器:旋涡混合器XW-80A，电子天平BS-6WL型，722S可见分光光度计，振荡培养箱HZQ-X100，隔水式电热恒温培养箱DYX-DHX-400-BS-Ⅱ型，医用型洁净工作台DL-CJ-2N，立式压力蒸汽灭菌器YXQ-LS-50SⅡ型，电热恒温水温箱CU600型，电热恒温鼓风干燥箱GZX-GF101-2-S-Ⅱ型，微量加样枪。②材料:TTC显色剂，TPY培养基，试验菌株为嗜热链球菌。

1.2 方法:①原理:常规测定菌体浓度的方法有多种，如离心法、稀释平板计数、重量法、血球计数板计数法、电导率法等。对于培养液没有固体颗粒和色素产生的体系，比浊法最为简便、迅速。当光线通过菌悬液时，菌体的散射和吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，菌体浓度与透光度成反比，与吸光度成正比。结合涂布平板法和比浊法，先绘制吸光度与活菌数对数值的关系曲线，再结合该曲线所测各时间段的吸光度值对应一个活菌数的对数值，可以更快绘制出该菌的生长曲线。②吸光度与活菌数对数值关系曲线的绘制:用生理盐水配制不同浓度的嗜热链球菌菌悬液，分别测定其吸光度，本实验波长采用600nm，将菌悬液做适当倍比稀释，取较小3个稀释度分别涂布于2个TPY琼脂培养基，37℃恒温培养48h后计数，以0D600值为横坐标，以活菌数对数值为纵坐标，绘制嗜热链球菌标准曲线。③吸光度与时间关系曲线的绘制:取0D600值为0.153的菌悬液，移取100μl菌悬液于100ml TPY液体培养基中，置于37℃振荡培养箱中培养，每一小时取出适量测量0D600值，持续12小时，以时间为横坐标，以0D600值为纵坐标，绘制嗜热链球菌吸光度与时间关系曲线。④生长曲线的绘制:将上述所测12小时的吸光度值代入标准曲线，得到12小时的活菌数对数值，以时间为横坐标，以活菌数对数值为纵坐标，绘制嗜热链球菌生长曲线。

2 结果与讨论

2.1 吸光度与活菌数对数值关系曲线，见图1。

可以看到，嗜热链球菌活菌数对数值与吸光度呈线性关系，线性方程为:y=5.6071x2+4.7859，R2=0.9913，则相关系数 R=0.9956，可信度较高。

2.2 吸光度与时间关系曲线的绘制，见图2。

2.3 生长曲线的绘制，见图3。

2.4 讨论:根据本次实验结果，嗜热链球菌的生长曲线有明显的迟缓期以及对数生长期。①迟缓期为0～8h。在此过程中，细菌的数量稍有波动，但是还是处于一个比较低的菌密度，没有快速的数量增长现象。②把8～11h为对数生长期。嗜热链球菌在一定的环境下经过了短暂的适应期，进如快速生长的时期，此时期营养充足，细菌以对数生长，生长速率远远大于死亡速率，嗜热链球菌的数目大量增加。③由生长曲线可见嗜热链球菌于8h时的生长速度最快，8h后减慢在于细菌数的增加使得产生生长竞争。④若于实验中发现嗜热链球菌生长速度过快，则有极大可能是被污染，在实验过程中必须严格按照无菌操作，每个时间段取菌液所用移液管必须经过高温烤箱灭菌过的，而且每个时间段所用需更换。

图1 吸光度与活菌数对数值关系曲线

图2 吸光度与时间关系曲线的绘制

图3 生长曲线的绘制

3 结论

本次实验所用嗜热链球菌的该菌株生长曲线如上所示，并在8h左右达到最大生长速度，因而用于其他实验该时间段的嗜热链球菌为最佳。

1 刘庆涛，李颖，杨正涛，等.金黄色葡萄球菌血清5型的培养条件及生长曲线的测定［J］.江苏农业科学，2007，5(19):5662-5663.

2 王升智，高波，周智慧，等.重组大肠杆菌DH5α生长曲线的测定［J］.黑龙江畜牧兽医，2010，21(11):96-98.

3 彭乙华，蔡燕，唐中，等.鲍曼不动杆菌生长曲线测定［J］.中华临床医师杂志(电子版)，2010，4(8):1297-1301.