王 钢，宋九华，伏秦超，任伟毅

（乐山师范学院化学与生命科学学院，四川 乐山614004）

古代医学认为，甘草慎与大戟、海藻、芫花和甘遂配伍，属于“十八反”之列［1］。《元亨疗马集》中甘草相关的十八反歌诀为：“大戟芫花并海藻，甘遂以上反甘草，若还吐逆及翻肠，寻常犯之都不好”。现代医学证明“十八反”配伍在特定的病理生理条件下，往往会产生对机体不利的不良反应，有时会增加毒性，有的是对方剂本身或其他药物的疗效产生干扰、拮抗乃至抵消。大戟、甘遂、芫花和海藻均为有毒中药，试验证明甘草中的某些成分具有使其他配伍药物的某些有毒成分增加溶解度的作用，但大戟、海藻、芫花和甘遂与甘草的配伍对甘草主要药理成分的影响鲜见报告［2－4］。故本试验拟以甘草主要药理成分为评价指标，探讨不同“反药”配伍对甘草主要药理成分的影响，为“十八反”在兽医中的应用提供参考。

1 材料与方法

1．1 仪器 LC－2010A高效液相色谱仪（日本岛津）配紫外检测器；色谱柱：Shim－pack VP18柱（150 mm×4．6mm，5μm）；FC204型电子分析天平（上海精科天平）；KQ－50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，）。

1．2 试验药品 生甘草、大戟、海藻、芫花和甘遂为药用饮片，购自乐山市中药材公司；异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐、甘草次酸等标准品，购自上海融禾医药科技发展有限公司；乙醇、冰醋酸、醋酸铵、磷酸、浓盐酸、三氯甲烷等均为国产分析纯，乙腈、甲醇为国产HPLC色谱纯，所有化试药物均用0．22μm滤膜过滤备用；水为自制重蒸水。

1．3 试验方法

1．3．1 标准溶液的配制 将异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸分别按表1所述进行标准溶液的配制。

表1 标准溶液的配制

1．3．2 仪器工作条件 通过试验，确定HPLC仪的最佳工作条件，具体的参数如表2所示。

表2 仪器工作条件

1．3．3 待检溶液的制备 称取大戟、海藻、芫花和甘遂0．5g四味药分别与0．5g的生甘草混合，分别置于不同三角瓶中，共4份。

1．3．3．1 异甘草素和甘草苷 在上述混合样品中分别加入10mL 50%乙醇，80℃水浴20min，超声（50℃，300W）提取10min，过滤，滤液经0．22μm微孔滤膜过滤，即得异甘草素、甘草苷待检溶液。

1．3．3．2 甘草酸单铵 在上述混合样品中加入40 mL蒸馏水，煮沸，再沸水浴20min，超声（50℃，300 W）提取10min，过滤，滤液经0．22μm微孔滤膜过滤，即得甘草酸单铵待检溶液。

1．3．3．3 甘草次酸 在上述混合样品中加入浓盐酸5mL，再加入三氯甲烷20mL，超声（50℃，300 W）提取2次，每次10min，合并三氯甲烷液，过滤。滤液蒸干，加入10mL甲醇溶解，经0．22μm微孔滤膜过滤，即得甘草次酸待检溶液。

1．3．4 标准曲线的建立 按HPLC仪的最佳工作条件分别对甘草中的4个主要药理成分分别进样2次进行检测，记录色谱图，将平均峰面积Y对进样量X进行线性回归，并分别计算出线性方程。

2 结果与分析

2．1 方法的专属性考察 在上述的色谱条件下，将对照品、供试品、甘草阴性对照等溶液注入HPLC色谱仪，结果显示阴性对照无干扰。

2．2 线性关系考察 通过对平均峰面积Y对进样量X进行线性回归，分别计算出各主要成分含量的线性方程。结果见表3。

表3 回归方程

2．3 精密度试验 精密移取对照品10．0μL，连续进样HPLC色谱仪5次，测定峰面积，得异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸峰面积的RSD分别为1．02%、0．96% 、1．05%和1．10%。

2．4 回收率试验 按1．3．3项制备样品溶液的方法精密称取适量的已测知含量的任一样品5份，制备不同的样品溶液，分别加入已知量的相应的对照品溶液。按照2．3项下的色谱条件测定，计算异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸的回收率，结果显示，其平均回收率分别为98．0%、98．8%、98．9%和99．6%。结果见表4。

表4 加样回收率试验结果 （n＝5）

2．5 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液10．0 μL，分别于0、4、8、12、24h注入 HPLC色谱仪，按照1．3．2项下的色谱条件测定异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸的峰面积。结果显示，异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸峰面积的RSD分别为1．02%、1．11%、1．07%、和1．15%，表明样品在24h内基本稳定。

2．6 待检样品溶液中甘草主要成分的测定 将1．3．3项下待检溶液进行测定并计算各成分的含量，并将其与生甘草中各主要成分含量分别进行方差分析。结果见表5。

表5 不同配伍甘草中各成分含量测定结果 （n＝3；±S）

表5 不同配伍甘草中各成分含量测定结果 （n＝3；±S）

注：同列数据肩标大写字母表示差异极显著（P＜0．01）；－：不能检出

组别 异甘草素（%） 甘草苷（%） 甘草酸单铵盐（%） 甘草次酸（%）生甘草 0．025 1±0．000 3 0．410 5±0．004 1 2．098 1±0．022 73．886 2±0．037 8大戟 － － － －大戟甘草 0．024 2A±0．000 2 0．411 2±0．003 9 2．158 1A±0．021 3 2．955 1A±0．028 9海藻 － － － －海藻甘草 0．025 4±0．000 2 0．398 7±0．004 0 2．650 3 A±0．025 7 3．059 7A±0．030 8芫花 － － － －芫花甘草 0．034 9 A±0．000 3 0．401 6±0．003 8 2．240 2 A±0．021 8 1．321 4A±0．012 3甘遂 － － － －甘遂甘草 0．023 8 A±0．000 2 0．385 6 A±0．003 5 2．130 7±0．020 5 2．709 2A ±0．026 7

数据用MICROSOFT EXCEL软件处理，单因素方差分析，并以平均值±标准差表示，结果见表4。从表4中可以看出，在同样的处理条件下，与生甘草相比，大戟与甘草配伍对异甘草素、甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著，甘草酸单铵盐的含量提高了2．9% ，异甘草素和甘草次酸的含量分别降低了3．6%和24．0%；海藻与甘草配伍对甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著，甘草酸单铵盐的含量提高了26．3%，甘草次酸的含量降低了21．2%；芫花与甘草配伍对异甘草素、甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著，异甘草素和甘草酸单铵盐的含量提高了39．0%和6．8%，甘草次酸的含量降低了66．0%；甘遂与甘草配伍对异甘草素、甘草苷和甘草次酸的含量影响极显著，分别降低了5．2%、6．1%和30．2%，甘草酸单铵盐影响不显著。

3 讨论

3．1 从药效方面来看，海藻、大戟、甘遂、芫花均为逐水消肿药，甘草的主要成分甘草酸水解后产生甘草次酸有类似肾上腺皮质激素样作用，能使水钠潴留。因此，从体内水盐代谢来看，甘草和这4味药是相反的，对治疗水肿这一指标来说应忌配伍。黄文权［3］等试验动物毒性药理试验研究结果证实了，海藻、大戟、甘遂、芫花和甘草的配伍对大鼠心肝肾有一定的毒副作用。

3．2 从检测结果可得出，除甘遂外，大戟、海藻、芫花和甘草配伍均可显著提高甘草酸的溶出率，结合3．1可推断，大戟、海藻、芫花和甘草配伍会加重由甘草酸导致的水盐代谢失衡等副作用。同时，海藻、大戟、甘遂、芫花同甘草的不同配伍能不同程度的影响甘草中主要药理活性物质的溶出率，这可能与其对机体的毒副作用有一定的相关性，但此推断还有待进一步研究证实。

［1］ 中华人民共和国药典委员会．中国药典（2005年版一部）［M］．北京：化学工业出版社，2005：79－80．

［2］ 楼锦英．“藻戟芫遂俱战草”之实验与临床研究述要［J］．海峡药学，2009，21（8）：145－147．

［3］ 黄文权，罗羽．甘草与甘遂、大戟、海藻、芫花配伍对大鼠心、肝、肾功能的影响［J］．中国临床康复，2004，8（18）：3682－3683．

［4］ 李生洪．甘草不良反应的研究［J］．时珍国医国药，2007，18（8）：2042．