任 桥，徐 玉，刘焕奇，张启迪，毕可东

（青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛266109）

氟苯尼考是由美国先灵－葆雅公司于20世纪80年代末研制成功的一种新型动物专用酰胺醇类广谱抗菌药，具有抗菌广谱、吸收好、体内分布广、安全高效等特点，对敏感菌所致的畜禽细菌性疾病治疗效果显著［1］。该药对敏感菌的抗菌活性与氯霉素和甲砜霉素相似，但对耐氯霉素及甲砜霉素的细菌仍然表现出较高的抗菌活性，如大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、溶血性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌及伤寒沙门菌等［2－4］。

氟尼辛葡甲胺是美国先灵－葆雅公司于20世纪90年代研发的已经批准的少数兽用非甾体类药物之一，其解热镇痛抗炎作用强，不良反应轻微，剂型和给药方式多样，靶动物和临床适应症广，为国外兽医临床消费量最大的非甾体类抗炎药［5－8］。

细菌感染性疾病不仅严重威胁动物的健康，而且还影响动物的生产性能。目前对畜禽的细菌性感染的治疗主要是采用抗生素疗法，依靠抗生素的抑菌杀菌作用，迅速清除体内病原菌。在兽医临床工作中，常注重应用抗生素的抑菌杀菌作用，而忽略对细菌感染性疾病的对症治疗。本试验以氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺为主药，既利用氟苯尼考对动物体内的病原微生物的抑制作用进行对因治疗，又利用氟尼辛葡甲胺的解热、镇痛，抑制炎性因子等作用进行对症治疗，研制氟苯尼考复方制剂，为氟苯尼考新制剂的研发和方便临床用药、提高疗效提供药剂学理论根据。

1 材料与方法

1．1 药品与试剂 氟苯尼考（含量99．3%，批号：100912），氟尼辛葡甲胺（含量99．4%，批号：1211－00409，齐鲁晟华制药有限公司），溶剂，购自天津市巴斯夫化工有限公司；N，N－2－甲基－乙酰胺，稳定剂，苯甲醇，乙醇胺等均为分析纯，购自天津市广成化学试剂有限公司。无水亚硫酸钠为市售商品。

1．2 仪器 AR2140电子分析天平（奥豪斯国际贸易上海有限公司）；HHSYⅡ电热恒温水浴锅（北京长风仪器设备厂）；DHG－9023A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精密试验设备有限公司）；YB－Ⅲ型澄明度检测仪（厦门中村光学仪器厂）；ZDX－35BI型坐式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；TH2－C型恒温振荡器（江苏太仓市实验设备厂）；85－2控温磁力搅拌器（金坛市恒丰仪器厂）。

1．3 复方氟苯尼考注射液的处方筛选及优化 采用单因素分析方法，并结合氟苯尼考和氟尼辛葡甲胺理化性质选取符合要求的溶剂、助溶剂、稳定剂、抗氧化剂和pH值调节剂。经过多次预试验，确定影响复方制剂稳定性的主要因素为辅料的种类及用量等。然后选择多种辅料进行正交试验，以药物含量作为处方筛选标准，以溶剂一、稳定剂、灭菌用水与溶剂一的比例、二甲基乙酰胺作为考察因素，采用L9（33）正交设计优选处方，正交试验设计见表1。

表1 正交因素水平考察

1．4 处方工艺 将氟尼辛葡甲胺加到一定量的灭菌用水中加热搅拌至澄清，然后加入无水亚硫酸钠，并加热到45℃搅拌至澄清，得溶液a；将氟苯尼考溶解在一定量的溶剂一中，用搅拌器匀速搅拌，使之完全溶解，然后加入二甲基乙酰胺、稳定剂，继续用搅拌器搅拌至澄清，得溶液b；合并上述的溶液a和溶液b，加热搅拌至澄清，再加入局部止痛剂苯甲醇，搅拌混合均匀后，用乙醇胺调节pH值6．5～7．5后，用微孔滤膜过滤，装瓶。

1．5 质量控制

1．5．1 澄明度检查 参照《中国兽药典》2010版第一部可见异物检测法进行澄明度检查［9］。取复方氟苯尼考注射液转移至洁净透明的专用玻璃容器内，用YB－Ⅲ型澄明度检测仪分别在黑色和白色背景下，用手持玻璃容器颈部使药液轻轻翻转，距20cm处观察。药液中凡有块状、点状物、玻璃屑、脱片等块状物、混浊和沉淀的，均作废品处理，不合格。

1．5．2 pH值检查 用精密pH计测定。

1．5．3 无菌检查 取复方氟苯尼考注射液6瓶，每批2瓶，采用直接接种法将药液接种在普通营养肉汤中，37℃培养48h后再接种至普通营养平板，37℃培养48～72h。取0．9%无菌氯化钠溶液同法操作，作为阴性对照；取0．9%有菌氯化钠溶液同法操作，作为阳性对照。若营养肉汤清亮透明，营养琼脂平板无菌生长，则表明制剂无菌，符合规定；若普通肉汤混浊或营养琼脂平板有菌落繁殖（涂片镜检），则不符合规定。

1．5．4 热原检查 根据2010版中国兽药典，采用家兔热原检测法［10］。取3批复方氟苯尼考注射液，取健康家兔3只，测定其正常体温后15min以内，按20mg／kg体重剂量，肌肉注射复方氟苯尼考注射液，然后每隔1h按前法测量体温1次，共6次。以6次体温中最高的1次减去正常体温，即为该家兔体温的升高度数。如3只家兔中有1只体温升高0．6℃或0．6℃以上，或3只家兔体温升高均低于0．6℃，但升高的总数达1．4℃或1．4℃以上，应另取5只家兔复试，方法同上。在规定的时间内观察家兔体温升高的情况，以判定该供试品中所含热原的限度是否符合规定。

2 结果

2．1 复方氟苯尼考注射液的处方筛选 按L9（33）正交表安排试验，由表2试验数据及极差R的大小可以判断出影响复方注射液稳定性的因素主次顺序为：溶剂一 ＞稳定剂＞灭菌用水与溶剂一的比值＞二甲基乙酰胺，并可得出最佳处方为A2B2C3D1的组合，即溶剂一（25%），稳定剂（10%），灭菌用水与溶剂一的比值（3∶2），二甲基乙酰胺（15%）。最优处方为氟苯尼考10%～30%，氟尼辛葡甲胺0．5%～2．5%，注射溶剂45%～65%，稳定剂10%，抗氧化剂0．1%～0．2%，灭菌用水加至100mL。

2．2 复方氟苯尼考注射液的质量控制

2．2．1 澄明度检查结果 结果表明，注射液为淡黄色澄清液体，均未检出可见异物，可以判定复方氟苯尼考注射液制剂澄明度符合药典规定。

2．2．2 pH值检查结果 注射液的pH值（要求与血液相等或接近），一般控制在4．0～9．0的范围内，经测定所配制的注射液的pH值都在6．5～7．5之间，符合注射液pH值要求。

2．2．3 无菌检查结果 将接种的营养肉汤48h后自培养箱中取出观察结果：注射液和阴性对照肉汤透明；阳性对照浑浊。再将肉汤和注射液分别接种至营养琼脂平板，恒温培养2d后取出观察：仅阳性对照有白色菌落。表明该制剂符合药典规定的无菌要求。

2．2．4 热原检查结果 热原检查家兔体温变化情况见表3。

表2 正交试验

表3 热原检查家兔体温变化情况

由表3可以看出，3只家兔体温升高分别为0．13℃、0．07℃、0．20℃，均低于0．6℃，升高总数为0．40℃，低于1．4℃，由此可以判定复方氟苯尼考注射液制剂中所含热原的限度符合药典规定。

3 讨论

本试验采用单因素结合正交试验的方法，成功制备了氟苯尼考的复方注射剂，且该制剂制备工艺简单，易于实现产业化生产。

正交试验表明，溶剂是影响注射液的主要因素，注射剂溶剂起溶解、混悬或乳化药物的作用，因此，必须符合注射用的要求。氟尼辛葡甲胺易溶于水，而氟苯尼考在水中几乎不溶，故选择溶剂时，应考虑二者的物理性质，选出合适的溶剂。通过多次预试验，表明溶剂一对注射剂稳定性的影响较大，可能由于氟苯尼考比较难溶，若溶解不彻底，短时间常温放置即可析出。通过加入助溶剂以增加其在某一特定溶剂中的溶解度，以达到临床治疗所需浓度要求，并能保持注射液的稳定性。通过试验表明，N－N－二甲基甲酰胺按一定比例加入，可以达到较好的溶解效果，但是经二甲基乙酰胺助溶后的氟苯尼考溶液，与水混合后很不稳定，需选择合适的稳定剂，增加注射液的稳定性，这与相关报道［11］相一致。

参照注射液的质量要求对复方氟苯尼考注射液分别进行澄明度检查、酸碱度检查、无菌检查和热原检查。结果显示，复方氟苯尼考注射液澄明度检查未检出可见异物，注射液pH值在6．5～7．5之间，无热原，无菌检查符合要求。

［1］ Nordmo R，Varma K J，Sutherland I H．Florfenicol in Atlantic Salmon，SalmosalarField Evaluation of Efficacy against Frurnculo－sis in Norway［J］．JournalofFishDiseases，1994（17）：239－244．

［2］ 周洪波．氟苯尼考和中药黄芪淫羊藿合剂对鸡体免疫反应的影响［D］．武汉：华中农业大学，2003．

［3］ 董永军．新型兽用广谱抗菌素氟苯尼考研究进展［J］．安徽农业科学，2006，34（15）：3693－3694．

［4］ Stein J．Chemically defined structured lipids：current status and future directions in gastrointestinal diseases［J］．Int J Colorectal Dis，1999，14（2）：79－85．

［5］ Odensvik K，Cort N，Basu S，etal．Effect of flunixin meglumineon prostaglandin F2alpha synthesis and metabolism in the pig［J］．Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1989，12（3）：307－311．

［6］ Odensvik K，Magnusson U．Effect of oral administration of flunixin meglumine on the inflammatory response to endotoxin in heifers［J］．American Journal of Veterinary Research ，1996，57（2）：201－204．

［7］ 陈杖榴．兽医药理学［M］．3版．北京：中国农业出版社，2009：186．

［8］ Adams H R．Veterinary Pharmacology and Therapeutics［M］．8th ed．Ames：Iowa State University Press，2000：442－443．

［9］ 中国兽药委员会．中华人民共和国兽药典第一部［M］．2010年版．北京：中国农业出版社，2011：95．

［10］中国兽药委员会．中华人民共和国兽药典第一部［M］．2010年版．北京：中国农业出版社，2011：129－130．

［11］刘照云．氟苯尼考溶液研制及其稳定性试验和临床疗效研究［D］．北京：中国农业大学，2005．