郝景锋，吴 斌，蔡华东，赵 权

（1．吉林农业科技学院动物医学学院，吉林 吉林 132101；2．吉林省磐石市园艺特产技术推广站，吉林 磐石 132300；3．吉林农业大学研究生院，吉林 长春 130118）

作为鸡球虫病主要的病原体之一，柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）对雏鸡的危害非常严重，针对柔嫩艾美球虫病，目前主要依靠药物防治和疫苗免疫。由于药物防治存在耐药性和药物残留问题，效果不太理想；同时，活苗免疫不但具有潜在的致病力，而且生产成本较高，免疫程序复杂，特别是免疫后的监测和管理技术要求较高，不能得到广泛应用［1］。这就需要找到其他更为安全、简单、廉价、有效的防治措施。近些年来，多种球虫保护性抗原基因被克隆表达，在已经报道E．tenella基因中，ScFv基因编码的抗原位于子孢子折光体上，在球虫孢子生殖阶段过渡到裂殖生殖阶段发挥很重要的生物学功能，其基因表达产物具有一定的免疫保护作用，而且对其他球虫具有一定的交叉保护［2］。因此，利用分子生物学技术研制基因工程疫苗已成为当前防治球虫病较为理想的选择。

本实验室已经对E．tenella子孢子表面抗原ScFv基因进行了克隆和序列测定，将目的基因连接pET28a（＋）载体进行原核表达后，对海蓝小公雏感染柔嫩艾美耳球虫的保护效果进行观察评价，为进一步在临床上控制鸡球虫病提供科学的依据。

1 材料与方法

1．1 材料 重组免疫毒素（吉林农业大学寄生虫实验室馈赠）：本试验构建重组毒素时使用的是pET28a（＋）表达载体，因其表达的蛋白产物N末端包含His－Tag，所以能够采用金属Ni2＋亲和层析柱方法纯化该目的蛋白。……