杨 丞，饶 翔，丁莉利，王明华

（1.海南医学院病理教研室，海南海口571101；2海南省海口市人民医院病理科，海南海口570208）

上皮间质转化（epithelial－mesenchymal transition，EMT）是具有极性的上皮细胞转换成具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质细胞的过程。近年有学者通过比较多种耐药细胞系和其亲本细胞系的形态和检测EMT标记性蛋白的表达，证实耐药细胞株发生EMT改变，并使细胞侵袭力增强［1］。但在化疗药物干预早期，EMT能否发生、发生的时间点及其与肿瘤细胞侵袭能力和耐药性之间的关系等问题，目前尚不清楚。本文通过体外细胞学实验研究，以低剂量短时间给药处理，详细观察顺铂诱导低分化宫颈癌HCE1细胞株EMT的时间点及其与肿瘤细胞侵袭能力和耐药性之间的关系，并明确Twist1是否为调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子。

1 材料与方法

1.1 材料 实验细胞：人低分化宫颈癌HCE1细胞株购自中南大学湘雅医学院细胞中心。主要试剂：高糖亚甲基双丙烯酰胺（dulbecco′s modified eagle′s medium，DMEM）培养基购自Gibco公司，新生牛血清购自杭州四季青公司，胰蛋白酶和二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）购自Amersco公司，四甲基偶 氮 唑 盐 （3－（4，5）－dimethylthiahiazo（－z－y1）－3，5－di－phenytetrazoliumromide，MTT）试剂购自Sigma公司，Transwell小室购自Corning Coster公司，基底膜Matrigel购自BD Biosciences公司，顺铂（批号：H37021358）购自山东齐鲁制药厂，相对分子质量300.3Da。一抗抗体Vimentin、E－Cadherin、PGlycoprotein购自ProMab公司。二抗羊抗鼠／兔抗体免疫组织化学试剂盒购自迈新公司。Trizol试剂购自Invitrogen公司，cDNA Synthesis Kit购自TOYOBO公司，PCR Master Mix（0.05units／uL Taq DNA Polymerase in reaction buffer，4 mmol MgCl2，0.4mmol dNTP）购自 Fermentas公司，DNA Marker DL2000购自TaKaRa公司，AGAROSE购自AMRESCO公司，10×DNA上样缓冲液购自ProMab公司。PCR引物用Primer premier 5.0软件设计，由Invitrogen公司合成。引物序列及产物长度如下：Twist上游引物：5′－GAG TCC GCA GTC TTA CGA G－3′，下 游 引 物：5′－ATC CTC CAG ACC GAG AAG－3′，长度282bp；……