紫杉醇对SHI-1细胞株增殖抑制及凋亡的影响
2013-09-21张云宁石培民
张云宁,石培民,谢 静
(扬州大学附属泰兴医院:1.检验科;2.血液科,江苏泰兴225400)
近年来新技术、新的抑癌药物不断涌现,但复发、难治性白血病的治疗,仍然是个难题。紫杉醇作为一种新一代植物碱类抗肿瘤药物,主要是通过作用于微管系统而抑制细胞分裂,被广泛用于卵巢癌、乳腺癌、黑素癌、肺癌的治疗。现将本研究通过体外观察紫杉醇对人急性单核细胞白血病细胞株SHI-1的增殖抑制、诱导凋亡及诱导分化的作用报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 SHI-1由苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所惠赠;紫杉醇为江苏扬子江药业集团产品;IMDM培养基为赛默飞世尔生物化学制品有限公司产品,胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品;DNA倍体分析试剂盒、异硫氰酸荧光黄(Annexin-V-FITC)、碘化丙啶(propidium iodide,PI)细胞 凋 亡 试 剂 盒、JC-1(5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)细胞凋亡试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养 将SHI-1细胞培养于含10%胎牛血清的IMDM培养液中,置37℃、饱和湿度、含5%CO2的恒温培养箱内培养。2~3d更换培养液1次或根据培养液的颜色进行更换。取对数生长期的细胞进行实验。
1.2.2 细胞活力和形态学观察 取对数生长期的细胞,以1×105/mL的细胞密度接种于24孔板中,每孔1mL,置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。再分别加入不同浓度的紫杉醇,使紫杉醇的终浓度分别为5、0.5、0.05、0.005mg/L组,同时设不加药物的空白对照组。每组设3个复孔。继续培养12、24、36、48h。用磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)洗涤2次后,用0.4%台盼蓝直接染色2~10min,在显微镜下计数活细胞数。每次计数3次,实验重复3次。……
