张 瑞，崔 朋，巴晓亮，汪 漫，

韩潇潇1，2，祁晶晶1，2，彭清洁2，陈 曦1，2，胡长敏1，2，陈颖钰3，郭爱珍1，2＊

（1.华中农业大学农业微生物国家重点实验室，湖北武汉430070；2.华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070；3.华中农业大学动物科技学院，湖北武汉430070）

牛支原体是严重危害肉牛和奶牛养殖业的常见病原体之一。在长途运输后的育肥架子牛，牛支原体主要导致肺炎，常继发关节炎、角结膜炎等多种症状；在奶牛，主要致乳腺炎，也可致犊奶牛肺炎和关节炎等［1－3］。在临床上，牛支原体常与多杀性巴氏杆菌A型、溶血曼氏杆菌等病原混合感染，使临床症状复杂化，加大治疗难度。

牛支原体于1961年在美国首次从乳腺炎牛奶中分离获得［4］。我国直到2008年才受到重视，主要因为该病原导致肉牛运输后暴发牛支原体肺炎［5－6］。2011年和2012年先后完成了2株牛支原体基因组测序［7－9］，并建立了一系列临床诊断方法［10－12］。虽然牛支原体感染给全世界肉牛和奶牛养殖业带来了巨大的经济损失，但临床上一直缺乏有效的防控手段。这与牛支原体在牛体持续存在、条件性致病、对常用抗生素不敏感、易产生耐药性、致病机制和免疫机制不清楚、缺少实验动物模型等有关［12］。鉴于疫苗是预防传染病的重要手段，本研究通过牛体感染试验比较4株牛支原体临床分离株的毒力和免疫原性，从中筛选免疫原性良好的菌株作为候选疫苗的备选菌株，为研发牛支原体疫苗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 PPLO培养基为BD公司产品；SABC染色试剂盒、DAB显色剂为武汉博士德生物有限公司产品。……