杜 丽，成 鹰，史巧芸，焦寒伟，荣 辉，张珈宁，贾晓晓，郭莳雨，朱华培，王凤阳

（1.海南大学农学院，海南海口570228；2.海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海南海口570228；3.海口市动物基因工程重点实验室，海南海口570228）

戊型肝炎（Hepatitis E）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的、以黄疸为主的急性病毒性肝炎［1］。在我国发生的急性病毒性肝炎流行中，戊型肝炎约占10%，主要以Ⅰ型HEV和Ⅳ型HEV为主［2－3］。近年来，戊型肝炎作为一种重要的人兽共患病，引起了越来越多学者的关注［4－5］。

HEV基因组全长7.6kb，ORF1、ORF2和ORF3共3个编码框，其中，pORF3与细胞信号调控关系密切［6］。脂肪因子既包括传统意义上的瘦素、脂联素、抵抗素、内脂素，也包括与炎症及免疫相关的细胞因子，如肿瘤坏死因子－A、白细胞介素－6等。这些因子的生成与功能失调与肝脏炎症、纤维化和免疫系统紊乱密切相关［7－11］。为了探讨 HEV ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制，应用蛋白芯片技术分析稳定表达ORF3的HEK293细胞显著上调／下调的脂肪因子的表达。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞 稳定表达genotypeⅣHEV的pEGFP－ORF3的HEK293细胞和稳定表达pEGFP的HEK293细胞由本实验室构建［6］并保存备用。

1.1.2 蛋白芯片 Human Adipokine Antibody Array Kit为RayBiotech公司产品，该芯片包括62种人脂肪因子的抗体，以及确保试验成立的阴性和阳性对照（图1）。

1.2 方法

1.2.1 细胞总蛋白提取 稳定表达genotypeⅣHEV的pEGFP－ORF3的HEK293细胞，稳定表达pEGFP的HEK293细胞总蛋白提取参照文献［6］进行。

1.2.2 蛋白芯片分析 蛋白芯片分析参照说明书进行：①封闭与孵育。将点有抗体的膜浸入2mL封闭液中，室温孵育30min后，将膜与1mL总蛋白样本在室温条件下在密封袋中孵育1h～2h。……