肠炎沙门菌fliC蛋白的表达及ELISA 检测方法的建立

2013-09-21邓显文谢芝勋刘加波谢志勤庞耀珊谢丽基罗思思

动物医学进展 2013年6期

邓显文，谢芝勋，刘加波，谢志勤，庞耀珊，谢丽基，范晴，罗思思

（广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁530001）

肠炎沙门菌是目前引起人类食物中毒的主要病原之一，其感染主要是因食用了被肠炎沙门菌（Salmonella Enteritidis）污染的动物性食品，尤其是家禽的肉蛋食品，近年来，肠炎沙门菌食物中毒和动物感染肠炎沙门菌十分严重，已引起畜禽防疫和公共卫生界的高度重视［1－4］。目前应用PCR技术对SE的检测已有报道［5－7］，PCR检测方法虽然快速、敏感性较高，但只是对病原DNA检测。ELISA是当前生产中应用最广泛的血清学检测方法，具有特异、快速、简便、敏感性高等特点［8－10］。本研究利用PCR方法扩增SE的fliC基因主要抗原区，连接于表达载体pGEX－4T－1中，构建成重组质粒pGEX－fliC，融合表达了重组鞭毛蛋白，初步建立了flic－ELISA检测肠炎沙门菌抗体的方法，为给临床检测肠炎沙门菌提供一种敏感度高、特异性强的血清学方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种肠炎沙门菌（SE28、SE29、SE30、SE75、SE90、SE221、SE635）、伤寒沙门菌（S.typhi）、副伤寒沙门菌（S.parutyphi）、鸡沙门菌（S.pullerium）由美国康州大学Khan教授惠赠，马流产沙门菌（CVCC514）、肠炎沙门菌（CVCC2182、CVCC2184）、猪霍乱沙门菌（CVCC2179）、伤寒沙门菌（CVCC2213）、雷丁沙门菌（CVCC2210）、甲型副伤寒沙门菌（CVCC2189）、鼠伤寒沙门菌（CVCC2233）、肠炎沙门菌亚种（CVCC3374、CVCC3375、CVCC3377、CVCC3378）由中国国家兽医微生物菌种保藏管理中心购买；鸡毒支原体（IC）、传染性鼻炎（IC）、禽流感病毒（AIV）、鸡新城疫病毒（NDV）阳性血清，载体pMD18－T，受体菌DH5α，均由本实验室保存。

1.1.2 主要试剂 96孔酶标板，羊抗鸡IgGHRP，BSA及四甲基联苯胺（TMB）为晶美生物工程有限公司产品。