李 茜 高 峰 杨学文

1.南京中医药大学针药结合重点实验室，江苏南京 210046；2.南京中医药大学附属医院检验科，江苏南京 210029

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）急性期发病迅速，病程持续，关节僵硬肿痛，甚至生活不能自理，给患者造成极大的痛苦。目前临床治疗方案多以大量使用激素及免疫抑制剂为主，这种方案主要有两大问题：一是具有不可忽视的副作用；二是对一些不适宜使用激素或免疫抑制剂的患者无从下手。因而近年来中医药治疗RA的作用越来越引起关注，从瘀热的病理角度治疗类风湿关节炎得到普遍认同[1]。本研究测定大鼠关节滑膜组织中磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）在大鼠胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）模型形成以及应用犀角地黄汤治疗过程中的表达水平，目的在于进一步探讨犀角地黄汤治疗RA急性期的作用机制。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

6～8 周龄雄性 SD 大鼠 45 只，体重（150±10）g，购于上海斯莱克实验动物中心。

1.2 药品与试剂

犀角地黄汤（犀角、生地黄、芍药、丹皮、虎杖、地龙）由南京中医药大学附属医院药剂科配制。鸡Ⅱ型胶原蛋白、完全福氏佐剂购自美国Sigma公司；Trizol购自Invitrogen公司；反转录试剂盒、DNA marker、Taq DNA聚合酶试剂盒购自大连TaKaRa公司；引物、探针委托Invitrogen公司合成：根据文献[2]合成PLC-γ1（Forwards：5'-GTCGACCTCATCAGCTACTA-3'；Reverses：5'-GGCTGTTCTCATCCAGATGC-3'） ，采用看家基因磷酸甘油脱氢酶（GAPDH）（Forwards：5'-TCCCTCAAGATTGTCAGCAA-3'；Reverses：5'-AGATCCACAACGGATACATT-3）作为内对照。

1.3 仪器

Eppen-dorf Centrifuge 5417R高速冷冻离心机、Biophotome-ter紫外可见分光光度计为德国Eppendorf公司产品；ABI7500实时荧光PCR仪为美国ABI公司产品；凝胶成像系统为日本Kodak公司产品。

2 方法

2.1 大鼠分组及CIA模型构建

2.1.1 分组 将6～8周龄雄性SD大鼠45只， 于清洁环境中适应性饲养1周后，应用随机方法分为3组，即空白对照组，CIA模型组，犀角地黄汤实验组，每组15只。……