范云鹏 姜雅秋 张 华 (吉林大学白求恩第一临床医院，吉林 长春 3002)

高同型半胱氨酸血症(Hhcy)是动脉粥样硬化(AS)的独立危险因子，主要是通过血管内皮损伤、氧化应激、内质网应激、干扰脂质代谢以及促炎症因子的激活等途径导致心血管疾病的发生〔1，2〕。sICAM-1 与 SP-选择素在炎症、栓塞中起重要作用，是反映血小板及内皮细胞活化的特异标志物。本实验通过建立Hhcy大鼠心肌梗死模型，并在叶酸、维生素(Vit)B12干预下，进一步探讨Hhcy与sICAM-1、SP-选择素的关系。

1 材料与方法

1.1 动物及饲料 SD大鼠体重130～160 g，辽宁省长生生物技术有限公司，许可证号SCXK(辽)2010-0001，SPF级，辽宁省实验动物质量合格证0002777(2011-9-9)。饲料为繁育鼠全价固体颗粒饲料，沈阳市于洪区前民动物饲料厂提供。

1.2 药品及试剂 L-半胱氨酸(L-Cysteine)，Sigma公司(C7352)。sICAM-1、SP-选择素、同型半胱氨酸(Hcy)等测定试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.3 主要仪器 RM6240多道生理信号采集系统，成都仪器厂。UV-265FW紫外分光光度计，日本光电工业株式会社。A5082酶标仪，Tecan Austria GmbH。HF328-U86深冻冰箱，北京力康生物医疗科技控股有限公司。JW-I型微型人工呼吸机，第二军医大学。10、200、1 000 μl微量移液器，上海荣泰生化工程有限公司。FA1004V电子天秤，上海精密科学仪器厂。

1.4 方法 取SD大鼠30只，随机分为3组，每组10只，雌雄各半。正常对照组:腹腔注射生理盐水5 ml·kg－1·d－1，灌胃给予生理盐水5 ml·kg－1·d－1。Hhcy模型组:腹腔注射2%L-半胱氨酸 5 ml·kg－1·d－1，灌胃给予生理盐水 5 ml·kg－1·d－1。叶酸 +VitB12干预组:腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml·kg－1·d－1，灌胃给予叶酸 2.5 mg·kg－1·d－1，VitB1225 μg·kg－1·d－1。连续给药12 w，各组于末次给药30 min后腹腔注射戊巴比妥钠(45 mg/kg)，麻醉后气管插管安装呼吸机，开胸结扎冠状动脉左室降支90 min后松开结扎线，于再灌注90 min后取血，分离血浆，置于－80℃冰箱保存，备检相关指标。按试剂盒说明书进行操作。

1.5 统计学方法 所得数据均进行正态性检验，正态分布的统计指标用±s表示，两组间数据对比采用t检验，用Minitab 15统计学软件进行分析。

2 结果

2.1 各组血浆Hcy水平比较 三组间两两比较，血浆Hcy水平均有显著差异(P＜0.01)。见表1。

2.2 各组sICAM-1、SP-选择素水平比较 Hhcy模型组和正常对照组比较、Hhcy模型组和叶酸+Vit B12干预组比较均有显著差异(P＜0.01)。见表1。

表1 Hcy、sICAM-1、SP-选择素在各组中的水平(±s，n=10)

表1 Hcy、sICAM-1、SP-选择素在各组中的水平(±s，n=10)

与正常对照组比较:1)P＜0.01;与Hhcy模型组比较:2)P＜0.01;下表同

组别 Hcy(μmol/L) sICAM-1(ng/ml)SP-选择素(ng/ml 5.26±0.61 1.28±0.10 9.66±0.87 Hhcy模型组 19.88±5.031) 1.98±0.091) 16.11±2.831)叶酸+VitB12组 8.96±5.421)2) 1.61±0.151)2) 11.22±0.671)2))正常对照组

2.3 各组乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平比较 Hhcy模型组和正常对照组比较、Hhcy模型组和叶酸+VitB12干预组比较，LDH、CK水平均有显著差异(P＜0.01)。见表2。

表2 三组LDH、CK水平比较(±s，n=10)

表2 三组LDH、CK水平比较(±s，n=10)

组别 LDH(mmol/L) CK(U/ml)5.59±0.44 1.27±0.49 Hhcy模型组 10.60±1.911) 5.78±0.651)叶酸+VitB12组 6.86±0.402) 2.47±0.492)正常对照组

3 讨论

Hcy是蛋氨酸代谢的中间产物，VitB12则是蛋氨酸合成的辅酶，而叶酸是体内甲基的间接供体，两者缺乏阻碍了蛋氨酸的再生成，导致 Hhcy〔3〕，补充叶酸和 VitB12能有效降低 Hcy水平。

sICAM-1是目前评价内皮细胞功能的敏感指标之一，当内皮细胞受到损伤被激活，循环白细胞在血管内膜聚集并黏附到血管内皮，细胞黏附分子如sICAM-1等在这一过程中起重要作用，参与了AS的发生与发展过程，是炎症细胞向斑块游走和浸润的必要条件。免疫组织化学证实斑块内皮细胞表达sICAM-1，其程度与内膜下单核细胞和T淋巴细胞密度密切相关〔4〕，抑制sICAM-1水平能减弱中性粒细胞的活性，增强冠状动脉血管功能的恢复，缩小缺血再灌注后坏死心肌的范围〔5〕。当受到内皮损伤、炎症反应、缺氧、自由基、ADP等的刺激后，P-选择素表达到细胞膜上，在多种血管活性因子sICAM-1等的共同作用下，相关黏附分子协同抵抗血流的作用，使白细胞、血小板、淋巴细胞等发生黏附、聚集，参与血小板与白细胞及血小板与内皮细胞之间的黏附和聚集，导致血栓形成〔6，7〕。本实验发现应用叶酸、VitB12可降低Hcy水平，sICAM-1、SP-选择素也相应降低，LDH、CK亦随之降低，从而起到减少梗死面积、保护心肌的作用。

1 Lawrence de Koning AB，Werstuck GH，Zhou J，et al.Hyperhomocysteinemia and its role in the development of atherosclerosis〔J〕.Clin Biochem，2003;36(6):431-41.

2 Wald DS，Law M，Morris JK.Homocysteine and cardiovascular disease:evidence on causality from a meta-analysis〔J〕.BMJ，2002;325:1202-9.

3 Ueland PM，Refsum H，Stabler SP，et al.Total homocysteine in plasma or serum:methods and clinical applications〔J〕.Clin Chem，1993;39(9):1764-79.

4 Adler A，George J，Keren G.The role of cytokines secreted by T cells in the pathogenesis of angina pectoris〔J〕.Harefuah，2003;142:612-5，645.

5 O'malley T，Ludlam CA，Rilemermsa RA，et al.Early increase in levels of soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1).Potential risk factor for the acute coronary syndromes〔J〕.Eur Heart J，2001;22(14):1226-34.

6 Mitsios JV，Papathanasiou AI，Rodis FI，et al.Atorvastatin does not affect the antiplatelet potency of clopidogrel when it is administered concomitantly for 5 weeks in patients with acute coronary syndromes〔J〕.Circulation，2004;109(11):1335-8.

7 Yip HK，Chang LT，Sun CK，et al.Platelet activity is a biomarker of cardiac necrosis and predictive of untoward clinical outcomes in patients with acute myocardial infarction undergoing primary coronary stending〔J〕.Circ J，2006;70(1):31-6.