许伟 位云艳 谭瑶曦 徐玮 程雁 吴剑卿

肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs）在肿瘤的发生发展、侵袭衍进、术后复发、治疗疗效和肿瘤耐药等方面发挥着重要作用。干细胞核心转录因子Sox2属于SOX（SRY-like HMG box）基因家族成员，包含DNA结合区HMG，在维持干细胞的自我更新、多向分化及重编程等方面发挥重要作用[1-3]。流行病学研究[4-7]提示，Sox2基因突变、甲基化或表达异常与多种癌前病变及肿瘤的恶性生物学行为有关。同时，研究者在脑膜瘤、骨髓瘤、乳腺癌和小细胞肺癌患者的血清中检测出Sox2自身抗体（Sox2-Ab）水平增高[8,9]。本研究采用实时荧光定量PCR、免疫组化及ELISA法检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）患者肿瘤组织Sox2表达和血清Sox2-Ab水平，旨在分析Sox2和Sox2-Ab在NSCLC的表达和意义，评价Sox2作为肺癌新的标志物及治疗靶点的价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源与处理 收集2010年1月-2013年3月江苏省肿瘤医院和南京医科大学第一附属医院组织及血清标本，包括58例NSCLC（基于2009年国际抗癌联盟UICC肺癌TNM分期，腺癌30例和鳞癌28例，表1）、16例其他类型肿瘤（乳腺癌4例、食管鳞癌2例、胃腺癌4例、肠腺癌3例和肝癌3例）以及20例正常肺脏的手术组织标本，术前均未经放化疗。病理（痰、胸水、肺活检及肺泡灌洗液等）确诊的肺癌患者治疗前血样30例（腺癌15例和鳞癌15例）及健康体检者血清30例。该研究得到南京医科大学第一附属医院伦理委员会同意。

1.2 方法

1.2.1 实时荧光定量PCR 按照EZNA FREE石蜡组织样本RNA提取试剂盒提取总RNA。利用逆转录试剂盒RevertAid First Strand cDNA synthesis Kit合成cDNA。基因库检索获得Sox2基因全长序列，利用软件Primer primier 5.0，设计上游引物：5-tggacagttacgcgcacat-3，下游引物：5-cgagtaggacatgctgtaggt-3，扩增片段长度为205 bp，引物由上海英俊公司合成。……