连小刚 李孝壁 程红艳

江苏豪森医药研究院有限公司，江苏连云港 222000

甲磺酸伊马替尼（imatinib mesylate）化学名称为4-[（4-甲基-1-哌嗪）甲基]-N-[4-甲基-3-[4-（3-吡啶）-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸盐，是一种高效特异的酪氨酸激酶抑制剂[1]。在合成工艺中用到甲醇、异丙醇，片剂生产中用到乙醇溶剂，在生产过程中，有可能与甲磺酸产生具有基因毒性的甲磺酸烷基酯类：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯[2-3]。

近几年基因毒性杂质成为人们关注的焦点[4]，甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸类物质与微量的低级醇在合成反应中生成烷基磺酸酯如甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、异丙基甲磺酸酯（IMS）、正丁基甲磺酸酯（NBMS）[5]，以及芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯（MBS）、苯磺酸乙酯（EBS）、对甲苯磺酸酯（MP-TS），这些物质可与DNA发生烷基化反应[6-7]，从而可能成为引发癌症的诱因，因此控制药物中该类杂质的毒理学关注阈值（TTC）水平非常重要[8-9]，欧洲医药评价署（EMEA），美国食品和药物管理局（FDA）及国际药品注册协调会议（ICH）先后对基因毒性杂质做出限度规定。

由于本品中甲磺酸烷基酯类的限度在中国药典没有规定，有必要对样品中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的残留量进行检测，本方法参考欧洲药典，采用衍生化的方法[10]，通过检测碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷来确定甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的量。

1 仪器与试剂

仪器：电子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC气相色谱仪，顶空进样器G1888；安捷伦色谱工作站；色谱柱：ZB-WAX（30m×0.53mm×1.0μm）。试剂：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为分析纯是国药集团化学试剂股份有限公司。

2 试验过程与结果

2.1 色谱条件

按照气相色谱法（中国药典2010年版二部 附录Ⅴ E），用聚乙二醇20M交联聚合物为固定相（或极性相似）的毛细管柱（ZB-WAX 30m×0.53mm×1.0μL），氢火焰离子化（FID）检测器，进样口温度110℃；检测器温度260℃；柱温40℃维持10min，以每分钟20℃的升温速率升至160℃维持3min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30min。取对照品溶液与供试品溶液分别顶空进样，进样体积3mL，记录色谱图，按碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷的出峰顺序；按外标法以峰面积计算。

2.2 试验溶液配制

供试品溶液配制：取本品适量，精密称定，按供试品与乙腈100︰1（mg︰mL）的比例配置供试品溶液，溶液经超声、薄膜过滤处理后，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为供试品溶液。

对照品溶液配制：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈制成每毫升含甲磺酸甲酯10μg、甲磺酸乙酯10μg、甲磺酸异丙酯10μg的溶液，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为对照品溶液。

2.3 系统专属性试验

精密称取甲磺酸甲酯99.2mg、甲磺酸乙酯102.8mg、甲磺酸异丙酯104.8mg分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为 1#、2#、3# 溶液。

分别移取1#、2#、3#溶液各1mL分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为4#、5#、6#液。

分别移取1#、2#、3#溶液各1mL置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液，标记为7#液。

分别精密移取4#、5#、6#、7#液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL的水、6g的碘化钠，扎盖密闭，分别标记为A甲磺酸甲酯衍生化测试液、B甲磺酸乙酯衍生化测试液、C甲磺酸异丙酯衍生化测试液、D对照品溶液，分别进样A、B、C、D溶液，记录色谱图。从表1可见，被测溶剂各峰的保留时间与对照品中各峰保留时间接近，最小分离度为3.1，符合实验要求，表明各溶剂的专属性强，专属性色谱图见图1。

图1 专属性气相色谱图

表1 专属性

2.4 定量限与检测限

精密称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，置100mL量瓶中，用乙腈溶解制成溶液，作为储备液。逐步稀释储备液，进行样品衍生化，并分别进样至信噪比（峰高/基线噪声）为3左右为检测限，至信噪比为10左右为定量限，结果见表2。由表2可见，该检测方法最小可准确检测0.6ppm的量，表明本方法对碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷可以准确定量检测。

表2 定量限与检测限

2.5 线性关系试验

精密称取甲磺酸甲酯100.1mg、甲磺酸乙酯103.3mg、甲磺酸异丙酯107.8mg，分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释定容。各移取上述溶液1mL置5mL量瓶中，用乙腈稀释至刻表度作为贮备液；分别精密移取贮备液0.3、0.6、0.9、1.2mL分别置于20mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为2#、3#、4#、5#液。移取上述溶液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL水、6g碘化钠，扎盖密闭，平行制备2份。分别进样上述溶液，平行2次进样，取峰面积的平均值与相应浓度回归，实验数据记录及线性回归方程见表3。

表3可见，甲磺酸甲酯在0.0721～12.0μg/mL、甲磺酸乙酯在0.0604～12.4μg/mL、甲磺酸异丙酯0.0679～12.9μg/mL的范围内，线性相关系数皆不小于0.999，说明线性良好。线性方程及相关系数见表3。

表3 回归方程及相关系数

2.6 回收率

精密称取甲磺酸甲酯101.3mg、甲磺酸乙酯100.8mg、甲磺酸异丙酯102.3mg置100mL量瓶，乙腈稀释至刻度，作为储备液。取供试品约300mg，置顶空瓶中精密称定，共称9份，用储备液进行配置成限量2、30、100ppm的测试液，置入顶空进样器中，定量测定的6个溶剂的平均回收率介于94.1%～111.3%之间，各溶剂回收率的最大相对标准偏差RSD为5.79%，表明本方法的准确性较好。

由表4可见，定量测定的甲磺酸烷基酯的平均回收率界于94.1%～111.3%之间，回收率的RSD最大为5.79%，表明本方法的准确性很好。

表4 精密度和准确度实验结果（n=6）

3 讨论

在前期预实验回收率测试时发现，在衍生化过程中，样品与碘化钠也发生衍生化反应，干扰甲磺酸酯的检测，影响碘代烷的收率，因此，采用与样品不溶而与甲磺酸烷基酯易溶的乙腈溶剂，对样品中的甲磺酸烷基酯进行超声、萃取。

本研究建立了衍生气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼中的基因毒性杂质甲磺酸烷基酯类的检测方法，该方法专属性好。对检测限、定量限的测定，说明此方法具有较高的灵敏度，此外，该方法线性与范围良好、准确度好，能对样品中的基因毒性杂质甲磺酸烷基酯类化合物进行很好的控制。

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