孙崇华 吴伟 孙宝生

【摘 要】本文论述了药物用高效液相色谱法含量测定的基本过程，为许多条件有限的实验室进行相关研究提供了一种可行的实用方法。

【关键词】含量测定；高效液相

本药物收载于中华人民共和国卫生部标准第十四册，按照《药品注册管理办法》、中药、天然药物分类及申报资料要求，已有国家标准的中成药和天然药物制剂的注册申请，质量标准应当有所提高。为此，对本药物质量标准进行了研究提高工作，除保留了原产品中华人民共和国卫生部所规定的检验项目外，又建立了蛇床子素的含量测定，并进行了方法学考察。

1.成分

蚕蛾渣、海龙、蛇床子等。

2.含量测定方法

2.1仪器与材料

2.1.1仪器

岛津高效液相仪（泵LC-10ATVP 紫外检测器SPD-10AVP）。

2.1.2材料

实验样品、蛇床子素对照品、其它试剂均为分析纯。

2.2试验的条件及方法

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙晴-水（65：35）为流动相；检测波长为322nm。理论板数按蛇床子素峰计算应不底于3000。

对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每1ml含1μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约2g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25ml。称定重量，放置两小时，超声处理（功率300w，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量。精密量取上清液5ml，置10ml的量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇均，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3考察项目

2.3.1空白试验

按处方组成份量，取蛇床子外的其余药味按工艺要求制成缺蛇床子样品，同供试品溶液制备方法制得空白对照溶液。

取空白对照溶液与供试品溶液及对照品溶液各10μl，依次注入液相色谱仪，测定。空白对照溶液在与对照品溶液相应的位置上不出峰，说明空白无干扰。

2.3.2线性关系考察

（1）相关系数及直线回归方程：

相关系数：是表示两个变量间直线关系亲密程度和相关方向的统计指标，用γ表示。

直线回归方程：在直线回归分析得到一个直线方程，成为直线回归方程.公式如下：

Y=b+aX

（2）分析方法：

分别取对照品溶液浓度为2μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml各10μl注入液相色谱仪，测得峰面积，以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一直线。

2.3.3精密度试验

同一供试品溶液依法测量8次，考察仪器的精密度。

2.3.4 重现性试验

按拟定的含量测定方法，取同一批样品6份，同一供试品溶液依法测量2次.计算相对标准偏差（RSD），检验方法的重现性。

2.3.5回收率试验

取同一批样品6份准确称取蛇床子对照品适量加入已知含量的样品（约为测定方法中样品的半量）中，按正文含量测定方法测定，计算回收率。

3.结果

3.1空白试验的结果

表1 空白试验结果

按处方组成份量，取蛇床子外的其余药味按工艺要求制成缺蛇床子样品，注入液相色谱仪，测定。样品溶液在与对照品溶液相应的位置上不出峰，说明空白无干扰。

3.2线性回归方程与相关系数

表2 不同浓度对照品含量测定的试验结果

根据上述浓度与峰面积的关系，得出：

γ=0.9999 b=20245.8737 a=-1677.5911

线性回归方程：

y=-1677.5911+20245.8737x

3.3精密度试验的结果

表3 样品测量8次的试验结果

同一供试品溶液依法测量8次， RSD=1.91%。说明仪器的精密度较好。

3.4重现性试验结果

表4 重现性的试验结果

取样品6份，按正文含量测定法操作， RSD=1.50%。说明仪器的精密度较好。

3.5回收率试验结果

表5 已知样品含量的测定结果

表6 加入蛇床子对照品后样品的试验结果

表7 回收率测定结果

回收率平均值102.54%，RSD=1.81%。

4.结论

本品的含量测定使用高效液相色谱仪，有较好的线性。试验测得精密度，重现性，回收率均符合规定。说明高效液相色谱仪能够完成对本药物的含量测定。

通过前述的空白、线性关系、精密度、重现性和回收率五项试验，根据求得的RSD的结果可知，本次试验的设计方法是可行的、结果是准确可靠的，对本药物的含量测定方法做出有效的论证。建议今后药品生产企业对本药物的含量测定可根据上述方法进行。

【参考文献】

[1]中华人民共和国国家药典委员会·中国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2010.

[2]中华人民共和国国家药典委员会中药材显微鉴别彩色图鉴一册.二册.人民卫生出版社，2010.

[3]吕圭源，王一涛.中药新产品开发.人民卫生出版社.