高瑞金 刘 学 崔卫波 谭海明 张碧成 陆倩倩 张雨梅

（扬州大学兽医学院 江苏 扬州 225009）

血管内皮细胞是铺陈于血管内壁的一层多功能细胞，在血管通透性屏障、免疫防御及炎性反应中起着极其重要的作用[1]。大量研究显示，血管内皮是许多心血管疾病或危险因子作用的重要靶器官，具有相当活跃的内分泌和代谢功能。血管内皮细胞具有多重的生物学特性，而大鼠是主要的实验动物，因此建立大鼠血管内皮细胞的体外培养方法对于研究内皮细胞特性、对作用于血管的药物及抗肿瘤药物的研究具有重要意义。本试验采用植块法分离大鼠血管内皮细胞，通过条件培养以及CD31免疫组化和管形成鉴定，建立了大鼠主动脉血管内皮细胞的体外培养方法。

1 材料与方法

1.1 材料

Wistar大鼠，雄性，200g左右，扬州大学比较医学中心提供。人重组VEGF165，美国Prospec公司；HGDMEM和胎牛血清(FBS)，美国Gibco公司；兔抗大鼠CD31抗体，美国Santa Cruz公司；羊抗兔FITC荧光抗体，瑞士Roche公司；Matrigel基质胶，美国BD公司；Trypsin、Pen/ Strep/ Amphotericin B、戊巴比妥钠、肝素钠，生物工程(上海)有限公司；羊抗兔即用型SABC免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒、Mayor，s苏木素均为武汉博士德生物工程有限公司产品；EDTA、氯化钠、氯化钾和磷酸二氢钾，天津科密欧化学试剂有限公司；多聚甲醛、甲醇、硫酸铜、碳酸氢钠和Na2HPO4·12H2O，国药集团化学试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 大鼠胸主动脉血管内皮细胞的分离与原代培养Wistar大鼠2%戊巴比妥钠麻醉后，经75%乙醇浸泡消毒后固定在手术板上，在超净工作台中打开胸腹腔，分离胸主动脉。……