许键炜，申长清，赵芳芳，舒莉萍，何志旭△

（1.贵阳医学院药理学教研室 550004；2.济宁医学院附属医院儿科，山东济宁 272029；3.蚌埠医学院微生物学教研室，安徽蚌埠 233030；4.贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心 550004）

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一类以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征的慢性全身性自身免疫性疾病［1］。RA在人群中的发病率约为0.24%～1.00%。其发病机制尚不十分明确。传统治疗方法以药物治疗为主，但仅能使患者的病情得到部分缓解，尚不能有效地逆转RA发生的病理生理改变。目前研究发现，骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有较好的免疫调节作用，能抗炎、抗纤维化及促进血管形成、修复受损组织［2］。分离、培养以及扩增MSCs简便、经济，可获取较多量的 MSCs。采用弗氏完全佐剂建立与人类RA类似的大鼠佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）模型［3］，方法成熟、简便。本研究采用MSCs治疗佐剂性关节炎大鼠模型，修复病损组织，达到治疗、干预AA的目的。为临床RA的防治提供实验理论基础，探索新的出路。

1 材料与方法

1.1 材料 SD雄性大鼠（贵阳医学院实验动物中心提供），低糖DMEM培养基（美国Gibco公司），0.25%胰蛋白酶及10%胎牛血清（美国Hyclone公司），弗氏完全佐剂（美国Sigma公司），倒置相差显微镜（日本Panasonic公司），CO2培养箱（美国Thermo Forma公司），流式细胞仪（FACS AriaⅡ，美国BD公司）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠 MSCs的体外分离、纯化、增殖培养、鉴定及收集 取5周龄SD大鼠，无菌条件下取双侧股骨，联合应用密度梯度离心和贴壁筛选法分离、培养大鼠骨髓中的MSCs。传至第4代，应用流式细胞仪进行细胞膜表面分子CD29、CD34、CD45及CD71的水平检测分析。……