苏彦文，张凤荣，苏彦斌

(1.吉林化工学院教务处，吉林吉林132022;2.吉林省食品药品检验所，吉林长春130033，3.吉林化工学院化学与制药工程学院，吉林吉林132022)

5-羟甲基糠醛 (5-Hydroxymethyl furfural，5-HMF)是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物［1-2］，对人体的横纹肌和内脏有损害作用［3-4］，是含葡萄糖等单糖注射剂中重要的有关物质［5］，因此，葡萄糖制剂均要控制5-HMF的限度［6］.目前，检测5-HMF的方法主要有紫外-可见分光光度法(UV)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)［7］.RP-HPLC 需要高效液相色谱仪，样品处理要求高、检测费时、成本高并需要对照品.UV法检测5-HMF，最大吸收波长为284 nm，样品在该处无干扰，参照5%葡萄糖注射液的限量，可以不用对照品，直接比较.本文分别用两种方法，测定奥拉西坦葡萄糖注射液中5-HMF的含量.

1 仪器与试药

岛津UV-1700紫外-可见分光光度计，Metter AE-163电子天平，奥拉西坦葡萄糖注射液样品(20120801、20120802、20120803、20121101).5-羟基甲基糠醛对照品，批号:BCBF6127V，Sigma公司，含量:99%.甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯.

2 方法与结果

2.1 紫外-可见分光光度法测定奥拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.1.1 专属性

取5-HMF对照品，加水制成约10 μg/mL的溶液，作为对照品溶液;取样品作为测试品溶液;另取奥拉西坦原料药适量，加水制成4%的溶液，加枸橼酸和枸橼酸钠适量，制成阴性对照溶液，取上述三种溶液，在200～400 nm用UV-1700紫外-可见分光光度计扫描，结果:对照品溶液在284 nm有最大吸收，奥拉西坦葡萄糖注射液也在284有吸收，阴性对照溶液在284 nm无吸收.

2.1.2 测定方法

精密量取奥拉西坦葡萄糖注射液样品20 m:(约相当于葡萄糖1.0 g)，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试品溶液.另取5-HMF对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液.分别取对照品溶液和测试品溶液，在284 nm波长处测定吸光度，用对照品法计算5-HMF的含量.

2.1.3 重复性

取奥拉西坦葡萄糖注射液样品1批，分别制备6份测试品溶液，作为供试品溶液.按2.1.2项下的测定方法测定.结果:样品的平均含量为0.003 0%(以葡萄糖的标示含量计算)，RSD为4.21%，结果表明重复性较好.

急性乳腺炎主要是指乳房部最为多见的急性化脓感染性疾病。因产后妇女的抵抗力严重下降,在出现乳汁淤积、乳头破损、乳管浸入乳房等情况后均会导致乳腺出现继发感染,并因此导致该病发生,多出现在哺乳期早期阶段[1]。中医认为哺乳期早期乳腺炎应归属于“郁滞期乳痈”的范畴,多以推拿疗法、外治法、针刺疗法等为主要治疗手段,而推拿疗法是哺乳期早期乳腺炎最常见的一种特色治疗方法。现结合我院接诊的哺乳期早期乳腺炎患者,对揉散法联合理疗治疗的方法及效果,做如下总结。

2.1.4 线性关系考察

取5-HMF对照品约 15 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 0.10、0.20、0.40、1.20、2.00、2.80、3.60 mL，分别置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在284 nm波长处测定吸光度，以浓度(μg/ml)对吸光度(A)回归处理，得线性方程:Y=0.1330X+0.002 3，r=0.999 8.结果表明:5-HMF溶液在0.15～5.4 μg/mL范围内，线性关系良好.

2.1.5 回收率实验

精密称取5-HMF对照品约5、10、15 mg各3份，分别置100 mL容量瓶中，按处方比例，加入奥拉西坦原料，按处方加入适量(枸橼酸25 mg，枸橼酸钠50 mg)辅料，加水适量使溶解，分别加入5-HMF对照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为测试品溶液.另取重复性项下的对照品溶液作为对照品溶液，同法测定，计算结果:平均加样回收率为99.56%，RSD为2.40%.

2.1.6 稳定性实验

5-HMF对照品溶液与测试品溶液，分别于0、1、2 h，在紫外-可见分光光度计上测定吸光度，计算含量，结果RSD为1.74%.结果显示:测试品溶液在2 h内稳定.

2.2 RP-HPLC法测定奥拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.2.1 系统适用性与色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Agilent C18(250 ×4.6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(10:90)为流动相，检测波长为284 nm，柱温:30 ℃，流速:0.7 ml/min，进样量 10 μl，理论板数以5-HMF计为5 000以上，如图1所示..

图1 A:5-HMF对照品;B:奥拉西坦葡萄糖注射液测试品;C阴性

取5-HMF对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成10 μg/ml的溶液，取奥拉西坦葡萄糖注射液样品作为测试品溶液.

2.2.3 专属性试验

取奥拉西坦原料药适量，制成4%的溶液，加枸橼酸和枸橼酸钠适量，制成阴性对照溶液，取溶液制备中的对照品溶液、测试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果显示:阴性对检测无干扰.

2.2.4 重复性

取奥拉西坦葡萄糖注射液样品1批，按上述色谱条件，分别测定6次.结果:样品5-HMF的平均含量为0.0030%，RSD为0.02%，表明重复性较好.

2.2.5 线性关系考察

取5-HMF对照品约 10 mg，精密称量，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.5、10 mL，分别置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别作为线性试验溶液(1)和(2);精密吸取线性试验溶液(1)1 μL和线性试验溶液(2)1、5、10、20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量(μg)对峰面积(A)回归处理，结果:5-HMF进样量在 0.001 494～0.199 2 μg范围内，线性关系良好，线性方程:Y=12 694.45X-3.36，相关系数r=1.0.

表1 5-HMF含量测定标准曲线数据

2.2.6 最低检测限和定量限

取对照品溶液，稀释至0.02 μg/mL的溶液，进样，记录色谱图，以信噪比S/N=3计算的最低检测限为0.41 ng，以信噪比S/N=10计算的定量限 1，60 ng.

2.2.7 回收率实验

精密称取5-HMF对照品(含量:99%)约5 mg 3份，分别置100 mL量瓶中，按处方比例，加入适量辅料，加流动相适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为测试品溶液.精密称取5-HMF对照品(含量:99%)约 5、10、15 mg各3份，分别置100 mL量瓶中，按处方比例，加入适量辅料，加流动相适量使溶解，分别加入对照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为测试品溶液，取对照品溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，结果:平均回收率为99.87%，RSD=1.2%(n=12)，结果精密度良好.

2.2.8 精密度实验

取5-HMF的对照品溶液(浓度为4.98μg/mL)，连续进样6次，每次进样1 μL，记录色谱图及峰面积，RSD为0.41%，实验结果表明精密度良好.

2.2.9 稳定性实验

取对照品溶液，按以上色谱条件，分别于0、2、4 h，精密吸取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，结果RSD为0.84%.结果显示:5-HMF对照品溶液在4 h内稳定.

2.3 样品测定

分别用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法，测定4批奥拉西坦葡萄糖注射液样品，结果含5-HMF分别为0.002 8%、0.002 9%、0.002 9%、0.003 0%，两种方法测定结果(紫外-可见分光光度法，用对照品法以吸光度计算，高效液相色谱法，用对照品法以峰面积计算，均以葡萄糖的标示量的百分含量计算)基本一致.

3 讨 论

专属性考查结果，两种方法阴性均不干扰实验，两种方法相比，UV 方法［8］:简单、快速、不需对照品;高效液相色谱法:相对成本高、麻烦、费时，还需要对照品等.因此，在阴性不发生干扰的前提下，应首选紫外-可见分光光度法，两种方法检测结果基本一致.

［1］Xian JC，Zhang N，Feng Y，Hong YL.Research for thermal stability of fructose，glucose，5-hydroxymethyl-2-furfural during the process of refining honey of honeyed pill［J］.Zhong Yao Cai，2011，34(9):1434-1437.

［2］Choudhary V，Mushrif SH，Ho C，Anderko A，Nikolakis V，Marinkovic NS，Frenkel AI，Sandler SI，Vlachos DG.Insights into the Interplay of Lewis and Brnsted Acid Catalysts in Glucose and Fructose Conversion to 5-(Hydroxymethyl)furfural and Levulinic Acid in Aqueous Media［J］.J Am Chem Soc，2013，135(10):3997-4006.

［3］Matsushita K，Ishii Y，Kijima A，Jin M，Takasu S，Kuroda K，Kodama Y，Ogawa K，Umemura T.Reporter gene mutation in the livers of gpt delta mice treated with 5-(hydroxymethyl)-2-furfural，a contaminant of various foods［J］.J Toxicol Sci，2012，37(5):1077-1082.

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［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:化学工业出版社，2010:928-930.

［7］Seo CS，Lee MY，Lim HS，Kim SJ，Ha H，Lee JA，Shin HK.Determination of 5-hydroxymethyl-2-furfural，albiflorin，paeoniflorin，liquiritin，ferulic acid，nodakenin，and glycyrrhizin by HPLC-PDA，and evaluation of the cytotoxicity of Palmul-tang，a traditional Korean herbal medicine ［J］.Arch Pharm Res，2012，35(1):101-108.

［8］Zhang C，Chai XS，Luo XL，Fu SY，Zhan HY.Rapid method for determination of furfural and 5-hydroxymethyl furfural in pre-extraction stream of biomass using UV spectroscopy［J］.Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi，2010，30(1):247-250.