冯兴军，李 静，宋雪莹，许文杉，邢丽维，柳 迪

（东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨150030）

抗菌肽（Antimicrobial peptides）是生物体在病原体刺激下，免疫防御系统产生的一类具有生物学活性小分子多肽，是动植物非特异免疫系统重要成分[1]，广泛分布于细菌、真菌、高等植物、昆虫、两栖类、哺乳动物以及人类体内[2]。抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用[3-4]。和抗生素相比，抗菌肽具有分子质量小、抗菌谱广、水溶性好、耐热性强、无免疫原性和作用机制独特等优点，不易引起微生物耐药性，被认为是替代抗生素有效药物之一[5]。

鸡源抗菌肽Fowlicidins-2能够快速杀菌，受盐离子浓度影响小，对抗性菌株有很强抑制作用[6]。天蚕素B（Cecropin B）具有抑制肿瘤细胞和免疫调节作用，对高等动物正常细胞无损伤，对DNA、RNA病毒有很强抑制作用[7]。Merrifield等对天蚕素A（Cecropin A）和蜂毒素（Melittin）进行结构改造后得到Cecropin A（1-8）-Melittin（1-18），不但没有蜂毒素溶血作用，其抗菌活性也有明显提高，且该杂合肽还具有较天蚕素A和蜂毒素更广抗菌谱[8]。死亡素（Thanatin）结构简单，对G+菌、G-菌和某些真菌都有抑制作用，但是对金黄色葡萄球菌活性较低，对哺乳动物细胞不表现出溶血性。本研究根据这四种抗菌肽氨基酸序列，设计合成四种抗菌肽融合基因，并利用基因工程方法在毕赤酵母中成功表达，为基因工程方法制备抗菌肽寻求技术路线，为进一步研究其功能和应用奠定理论基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 质粒及菌株

质粒pPICZαC、毕赤酵母SMD1168购自Invit⁃rogen公司；E.coliDH 5α、E.coliATCC25922、S.aureusATCC25923、S.syphimuriumC77-31和P.ae⁃ruginosaATCC27853为本实验室保存。

1.1.2 试剂