刘建民，栗茂腾

(1.华中科技大学生命科学与技术学院，湖北 武汉 430074；2.河南理工大学资源环境学院，河南 焦作 454000)

生物体内的脂肪酸分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFAs)是对人体有重要生理活性的物质，广泛应用于保健品和医药等行业。花生四烯酸(20：4Δ5,8,11,14，arachidonic acid，AA)是研究、应用较多的多不饱和脂肪酸之一，其广泛分布于动物的中性脂肪中[1]。在脑和神经组织中，AA的含量通常占总PUFAs的40%～50%，在神经末梢中更是高达70%，它在促进大脑和神经发育方面有着重要的影响[2]。前人的研究结果表明，AA在细胞内具有第二信使的作用，参与调控细胞的生命活动[3]；同时，在改善记忆力和视力、神经功能调节和炎症反应中都有重要的作用[4]。

AA有重要的生理功能，但人体不能自身合成，必须从外界摄取获得。被孢霉(Mortierella)的发酵生产是目前AA最主要的来源，但通过被孢霉发酵获得的AA有较浓的产生菌气味。在PUFAs的合成过程中，以双高γ-亚麻酸(20：3Δ8,11,14，dihomo-γ-linolenic acid，DHGLA)为底物，Δ5去饱和酶催化脂肪酸链第5、6位碳原子间脱氢形成AA。Δ5去饱和酶是AA合成途径中的关键酶，因此，克隆Δ5去饱和酶基因并对其功能进行验证，可以对AA的发酵生产提供理论支持。

本研究以实验室筛选的高山被孢霉W15为材料，通过RT-PCR的方法克隆到Δ5去饱和酶基因，将该基因转化毕赤酵母GS115菌株后，得到了表达产物，这为AA新来源的拓展提供参考。

1 材料与方法

1.1 菌株、试剂与培养基

菌株 高山被孢霉W15为实验室筛选和保种的菌株。

连接酶、限制性内切酶 加拿大Fermentas公司；……