陈 婷,吴继美,李任强

(暨南大学生物工程学系,广东广州510632)

陈 婷,吴继美,李任强

(暨南大学生物工程学系,广东广州510632)

利用QSepharoseTM-XL强阴离子交换色谱从虾的精氨酸激酶粗提液中纯化出精氨酸激酶,以其免疫大白兔,然后利用QSepharoseTM-XL强阴离子交换色谱从高免疫兔血清中纯化精氨酸激酶的多克隆抗体。采用SDS-PAGE检测精氨酸激酶及其抗体的纯度,并进行了活性测定。结果表明,利用QSepharoseTM-XL强阴离子交换色谱纯化出的精氨酸激酶及其多克隆抗体纯度高、活性强。建立了快速高效、操作方便而又适合实际应用的制备精氨酸激酶及其多克隆抗体的方法,可为精氨酸激酶及食品过敏的相关研究提供帮助。

QSepharoseTM-XL强阴离子交换色谱;精氨酸激酶;多克隆抗体;纯化

精氨酸激酶(ATP:精氨酸N-磷酸转移酶,EC 2.7.3.3.Argininekinase,AK)是磷酸原激酶家族的一员,对于调节无脊椎动物磷酸精氨酸与ATP之间能量的平衡具有重要作用[1],还与机体的病原识别、免疫反应等多种重要的生理过程密切相关[2-4]。近年来的一系列研究表明,AK在肌肉组织内大量表达[5],为甲壳类动物体内最重要的致敏原之一[6,7]。虽然目前对于AK的基因克隆表达、分子结构、催化特性等的研究较多[8],但直接从甲壳类动物中提取纯化AK的报道不多,且分离纯化方法普遍较繁杂、效率不高,如姚翠鸾等[9]采用CM-纤维素批量层析、SephadexG-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析等多个步骤从凡纳滨对虾中分离纯化AK。因此,若能快速高效地直接从动物组织中纯化出AK,对于开展AK的研究是相当有实用意义的。……