周贻军，赵亚男，赵 鑫，缪 绯，王先宝，颜 竞，张秀丽，刘映峰，杨平珍

(南方医科大学珠江医院，广州510280)

心肌营养素-1(CT-1)最初由Pennica等［1］在小鼠心脏胚胎干细胞中提取，因在体外具有促进心肌细胞生长的作用而命名为CT-1，其化学结构与IL-6相似，并且能与gpl30受体结合，归类为IL-6家族。在以往的研究中，CT-1只作为心肌疾病诊断和预后判断的标志物;最近的研究发现，其在心肌损伤中是一种重要的神经激素［2］。已有研究发现，缺血后适应可在缺血再灌注时保护心肌细胞［3］，即缺氧后适应在缺氧复氧时可保护心肌细胞，其机制可能与激活细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路有关［4］。2012年9月～2013年3月，本研究就CT-1与缺氧后适应对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及与ERK1/2通路的关系进行探讨。

1 材料与方法

1．1 材料 H9C2细胞株，由南方医科大学珠江医院实验室提供。新生牛血清、胎牛血清、DMEM-高糖培养基、青链霉素、PBS缓冲液。Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(Keygen，货号 KGA106)。phospho-p44/42 MAPK(Erk1/2)购自 Cell Signal Technology。Goat Anti-Rabbit IgG(H+L Chain Specific)购自Southern Biotech。定量PCR用酶SYBR Green PCR Master Mix购自TOYOBO公司。CT-1购于Peperotech公司。二甲基亚砜购于Sigma公司。内参抗体:HRP标记的优质内参，购于上海康成公司。

1．2 方法

1．2．1 细胞培养 H9C2心肌细胞株在含10%胎牛血清的DMEM-高糖培养基，37℃、5%CO2培养箱中培养，复苏细胞正常传2、3代后，取指数生长期的细胞进行实验。

1．2．2 实验分组及处理 正常对照组(a组):细胞用含10%新生牛血清的DMEM液正常培养，不经任何处理。缺氧复氧组(b组):采用pH 6．8 D-Hanks液在缺氧培养箱(95%N2、5%CO2、37℃)培养3 h;将pH 6．8的D-Hanks换成含10%新生牛血清的DMEM 液，在 MCO-17AICO2培养箱(95%O2、5%CO2、37℃)复氧3 h。缺氧复氧+缺氧后适应组(c组):在复氧前施加5 min复氧/5 min缺氧3个循环，其他同b组。……