袁玉和

（河南省平舆县食品药品检验所，河南 平舆 463400）

薄层色谱法测定注射用硫酸奈替米星的有关物质

袁玉和

（河南省平舆县食品药品检验所，河南 平舆 463400）

目的 探讨测定不同硫酸奈替米星有关物质的薄层色谱条件，选择合适的展开系统和高灵敏度的显色剂，保证分离度良好，Rf值合适，且可准确检测硫酸奈替米星的有关物质。方法 采用硅胶 G 板和 GF254 板，采用了不同比例的二氯甲烷∶甲醇∶浓氨和氯仿∶甲醇∶浓氨，以不同显色溶液为显色剂。结果 硅胶 GF254 板采用氯仿∶甲醇∶浓氨（2 ∶ 1 ∶ 0.3）展开系统，1% 碘的四氯化碳溶液，可得到很好的分离度，灵敏度。结论 本研究的薄层色谱条件具有灵敏度高，分离效果好，显色迅速的特点，可用于不同注射用硫酸奈替米星有关物质的检测，。

薄层色谱法；硫酸奈替米星；有关物质；显色剂；展开剂

硫酸奈替米星（又称乙基西梭米星），是国内已经广发应用于临床的新型氨基糖苷类广谱抗生素，具有广谱的抗菌效果，而且其是氨基糖苷类中细菌耐药性、耳毒性、肾毒性最小的，不需多次给药，日内单剂量给药即可满足组织药物浓度，提高疗效且降低毒性。主要剂型是注射液，包括葡萄糖、山梨醇、氯化钠等多种注射液[1]。但由于奈替米星及注射液性质，多存在不稳定性的问题，一般会加入大量的稳定剂和抗氧化剂，不利于临床的安全使用[2]。奈替米星的有关物质主要为生产过程中引入，主要有西梭米星及降解产物，以西梭米星毒性最大。国家药典的方法仍有拖尾或无法检测的问题存在，本研究在药典方法的基础上不断改善，取得了良好的分离度和灵敏度，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试药

高效硅胶GF254薄层板（100mm×200mm）青岛海洋化工厂；高效硅胶G薄层板（100mm×200mm）青岛海洋化工厂；展开缸（50mm×100mm×200mm）。注射用硫酸奈替米星（济南利民制药有限责任公司，浙江震元制药有限公司；福州福药制药有限公司）；对照品：奈替米星（中国药品生物制品检定所，批号130355-200702），西梭米星（中国药品生物制品检定所，130353-200001）。山梨醇原料批号：110708，南宁化学制药责任有限公司；二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、浓氨水、碘、四氯化碳均为分析纯试剂。

1.2 方法与结果

1.2.1 展开系统及硅胶板的选择

A：二氯甲烷∶甲醇∶浓氨（4∶4∶2）；B：二氯甲烷∶甲醇∶浓氨（5∶3.5∶1.5）；

C：氯仿∶甲醇∶浓氨（5∶3∶1）；D：氯仿∶甲醇∶浓氨（5∶ 12∶6）；E：氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）

结果：见表1，从表中可知每种展开剂都可分离奈替米星和西梭米星，但是不同展开剂Rf值不同，最后综合比较，认为E展开剂系统氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）为最佳。

表1 不同展开系统的比较

1.2.2 显色方法

A：0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液；B：饱和碘蒸气；C：1%碘的四氯化碳溶液。

1.2.3 操作方法

取不同厂家的硫酸奈替米星注射剂配制成1mg/mL的供试品水溶液A、B和C。分别配制含奈替米星0.5mg/mL、1.0mg/mL的水溶液，作为对照品溶液D和E；配制含西梭米星0.50mg/mL的水溶液，作为对照液F用微量吸样器吸取上述溶液2μL点样于距离薄层板下端1.5cm处，控制在2mm误差以内，分别点于同一薄层板上，置于不同展开剂系统中展开后，晾干，置不同显色剂下显色。

1.2.4 定量下限

将上述奈替米星溶液和西梭米星稀释至50μg/mL，100μg/mL，150μg/mL，200μg/mL，500μg/mL的溶液，分别吸取2μL点于同一硅胶薄板，同时用不同展开剂和显色剂显色。

结果：1%碘的四氯化碳溶液斑点显色为黄色，背景色为白色，灵敏度最高，定量下限可达到0.1μg（50μg/mL×2μL）。其他显色剂的灵敏度均为0.4μg，且背景颜色与斑点颜色反差不是很大，效果不明显。

选择硅胶GF254薄层板，氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）为展开系统，0.1%的碘四氯化碳溶液为显色剂，为最佳检测方法。

2 方法考察

2.1 方法专属性

取3个不同厂家的注射用硫酸奈替米星注射液、山梨醇，按“1.2.3操作方法”操作，点于同一硅胶GF254薄层板，氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）展开，0.1%的碘四氯化碳溶液显色。

结果：山梨醇及有关物质的斑点与奈替米星主斑点分离度良好，前后无杂质斑点。

2.2 加速破坏试验

取3个不同厂家的注射用硫酸奈替米星注射液，按“1.2.3操作方法”配制溶液，分别进行如下破坏性试验[3]：

2.2.1 酸破坏试验

取供试品溶液1mL加入1mol/L的盐酸溶液1mL，沸水浴中加热30min，冷却后，照“2.1方法专属性”下方法测定。

2.2.2 碱破坏试验取供试品溶液1mL加入0.2mol/L的氢氧化钠溶液1mL，沸水浴中加热30min，冷却后，照“2.1方法专属性”下方法测定。

2.2.3 氧破坏试验

取供试品溶液1mL，加3%H2O2溶液1mL，沸水浴中加热30min，冷却后，照“2.1方法专属性”项下方法测定。

2.2.4 高温破坏

将注射用硫酸奈替米星注射液置沸水浴中煮沸2h，冷却后，配制供试品溶液，照“2.1方法专属性”项下方法测定。

2.2.5 光破坏试验

将注射用硫酸奈替米星注射液置5000Lx光照强度下放置48h，配制供试品溶液，照“2.1方法专属性”项下方法测定。

结果：硫酸奈替米星在酸破坏、碱破坏、高温及光照，氧化破坏杂质斑点，均可以与主斑点分离。

2.3 有关物质检查

取不同厂家的硫酸奈替米星注射剂配制成1mg/mL的供试品水溶液，取奈替米星对照品溶液1mL、2mL置100mL容量瓶中，加水至刻度线，定容，得到对照品溶液A和B，另取西梭米星对照品溶液（0.04mg/mL），点于同一GF254板上，以氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）展开，0.1%的碘四氯化碳溶液显色。供试品溶液如有杂质斑点，其斑点颜色与对照溶液主斑点颜色相比较，不得更深（1%），其他杂质与对照溶液A所显主斑点相比较，均不得更深（1%），如有一点更深，应不深于对照溶液B的主斑点（2%）[4]。

结果：不同厂家的硫酸奈替米星注射液有关物质含量均合格。

3 讨 论

本研究改进了药典的方法，不仅提高了检测限，而且破坏试验的分离度良好，灵敏度高，有效地检出了生产过程中可能引入的杂质，不同硅胶板的分离效果有差异，不同展开剂的Rf值差异也较大，而且不同显色剂的灵敏度相差也比较大，故作者对根据试验设计的交叉试验，优化出了最佳的薄层色谱条件为硅胶GF254薄层板，氯仿∶甲醇∶浓氨（2∶1∶0.3）为展开系统，0.1%的碘四氯化碳溶液为显色剂。总而言之，本研究的薄层色谱条件具有灵敏度高，分离效果好，显色迅速的特点，可用于不同注射用硫酸奈替米星有关物质的检测。

[1]顾晔,杜渊,金新.HPLC法测定硫酸奈替米星的含量[J].科技传播,2012,2(16):80-81.

[2]杨立,陈卫波,翁德民.高效液相色谱法测定硫酸奈替米星注射液的含量[J].中国热带医学,2006,6(1):132-134.

[3]盛成德.薄层色谱法测定注射用硫酸奈替米星有关物质[J].广东药学,2003,13(5):23-24.

[4]章卫中.薄层色谱法检测硫酸奈替米星山梨醇注射液有关物质[J].海峡药学,2003,15(5):49-51.

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：1671-8194（2013）02-0062-02