刘 彤，李 洋，李丹妮，耿楠希，李 丰

（中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室 教育部医学细胞生物学重点实验室，辽宁 沈阳 110001）

人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

刘 彤，李 洋，李丹妮＊，耿楠希，李 丰

（中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室 教育部医学细胞生物学重点实验室，辽宁 沈阳 110001）

目的：构建人p21活化激酶6（PAK6）的各个截短区域原核表达质粒，并诱导和鉴定其融合蛋白的表达，为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法：以真核表达质粒pcDNA3.1－GFP－PAK6为模板，PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ／XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX－5X－1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coliBL21中，采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达，采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果：EcoRⅠ／XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段（5 000bp）和PAK6 1－55（165bp）、PAK6 56－210（465bp）、PAK6 211－410（600bp）及PAK6 385－681（891bp）4个片段。Western blotting检测，PAK6各截短区域质粒GST－PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论：成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。

P21活化激酶；截短区域；原核表达质粒；GST融合蛋白

人p21活化激酶 （p21－activated kinase，PAK）是保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，PAK为Rho家族小鸟苷三磷酸酶（Rho－GTPase）Cdc42／Rac1下游重要的靶蛋白，参与许多重要的细胞活动，如细胞骨架重建、细胞移动／迁移、细胞凋亡与生存和细胞周期与有丝分裂，而且与肿瘤细胞的侵袭转移密切关联［1－3］。PAK家族有6个成员，第1亚类包括PAK1～3，第2亚类包括PAK4～6。第1亚类成员含有自我抑制域，其激活依赖于上游Rho－GTPase，而第2亚类成员不含有自我抑制域，表达后具有持续的激酶活性［4－5］。……