金昊，谷景先，臧东钰

(1.辽宁医学院附属第三医院，辽宁 锦州121001;2.辽宁省辽河油田总医院，辽宁 盘锦 124000;3.辽宁省锦州军分区后勤部，辽宁 锦州 121001)

食管癌的发生、发展涉及多种基因及不同信号传导通路的异常变化。近年来研究发现，一个与胚胎发育密切相关的信号传导通路－Hedgehog (Hh)信号通路，在癌症的发生、发展中也起着重要作用［1］。本实验应用免疫组织化学技术观察Smo 蛋白的表达，探讨Hh 信号通路中的膜蛋白受体Smo异常激活与食管鳞癌之间的关系，为研究Hh 信号通路对食管鳞癌影响的机制提供一些理论基础。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂 50 例食管鳞癌及癌旁组织标本取自辽宁医学院附属第三医院和附属第一医院2010—2012 年手术切除标本。患者均为男性，年龄49～75 岁。Smo 兔多克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司，SABC 试剂盒购自武汉博士德生物制品有限公司。

1.2 免疫组织化学染色 石蜡切片脱蜡至水，3%H2O2孵育，蒸馏水冲洗，PBS 浸泡。高压修复后自然冷却，10% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭。滴加一抗工作液(1 ∶50)，4 ℃过夜，PBS 冲洗。滴加生物素化山羊抗兔IgG/兔抗羊IgG，湿盒内37℃孵育，PBS 冲洗。滴加SABC 试剂，湿盒内37℃孵育。PBS 冲洗，DAB 显色，核复染。自来水冲洗，脱水，透明，封片。

用已知的阳性对照片做阳性对照，以PBS 代替一抗作阴性对照。光学显微镜下观察并摄片。

1.3 结果判定 由两位病理医师分别对染色结果作出判定。以胞质或胞膜出现浅黄色至棕黄色颗粒判断为阳性，以染色强度结合阳性细胞百分比综合计分作定性分析［2］。随机选取10 个高倍视野，分别计数200 个细胞。……