何晓芬,方剑乔,蒋永亮,黄垒,裘晟晨,沈亚芳,尹小虎



电针治疗慢性炎性痛的促外周beta-END释放作用

何晓芬,方剑乔,蒋永亮,黄垒,裘晟晨,沈亚芳,尹小虎

(浙江中医药大学,杭州 310053)

观察电针治疗慢性炎性痛时对炎症局部炎性介质和外周阿片肽的双重干预作用。建立大鼠弗氏完全佐剂(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛模型,电针选用患侧足三里和昆仑穴,并与传统非甾体抗炎药消炎痛进行比较,观察热缩腿阈(thermal paw withdrawal latency,PWL)变化,检测足跖炎症组织前列腺素E2(PGE2)、白介素-1b(IL-1b)和beta-内啡肽(beta-END)。电针和消炎痛均可提高慢性炎性痛大鼠痛阈;电针不能显著降低炎症局部组织PGE2、IL-1b水平,但能显著升高炎症局部组织beta-END水平(＜0.05);消炎痛能显著降低PGE2和IL-1b水平(均＜0.01),但对beta-END水平没有显著影响。与传统的非甾体抗炎药相比,电针治疗慢性炎性痛具有促外周beta-END释放的作用。

电针;慢性炎性痛;炎性介质;阿片肽;内啡肽;大鼠

慢性炎性痛是临床上的常见症状,治疗多采用抗炎镇痛药,但长期使用常伴随严重的胃肠道毒副反应[1-3],其相应的机理研究也多局限于对炎性介质干预方面[4]。电针是临床上治疗慢性炎性痛的常用手段,具有良好的镇痛效应[5-6]。针刺镇痛的中枢阿片机制已被证实,但外周阿片肽是否参与针刺镇痛尚未明确。有研究表明[7],炎症局部的免疫细胞可释放阿片肽,参与外周镇痛。电针能否作为一种有效刺激促进炎症局部阿片肽的释放,进而发挥治疗慢性炎性痛的作用,目前缺少相应研究。本研究立足于电针治疗慢性炎性痛是否存在对炎症局部炎性介质和外周阿片肽的外周双重调节机制,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用健康雄性Wistar大鼠32只,体重为(170±10)g,购自中国科学院上海实验动物中心[SCXK (沪)2008-0016],由浙江中医药大学实验动物中心饲养。饲养期间给予啮齿动物标准颗粒饲养(由实验动物中心提供)及自由饮水,12 h循环灯光。

1.2 针具、药物和试剂

0.25 mm×13 mm无菌针灸针(苏州医疗用品厂有限公司);消炎痛片剂(广东华南药业有限公司)。弗氏完全佐剂(Complete Freund’s Adjuvant,CFA)由美国Sigma公司提供;PGE2EIA kit由美国Enzo公司提供; IL-1bEIA kit由美国Raybiotech公司提供;TNF-aEIA kit由美国Raybiotech公司提供;beta-END送至上海第二军医大学应用RIA kit检测。

1.3 仪器设备

足底测量仪(意大利UGO BASILE公司)、韩氏穴位暨神经刺激仪(北京华卫产业开发公司)、BECKMAN超高速离心机(美国贝克曼仪器公司)、紫外分光光度计(美国BIO-RAD公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 造模和分组

利用SPSS软件,采用完全随机分组法将大鼠分为4组,每组8只,分别为正常组、模型组、电针组、消炎痛组。除正常组不造模,仅注射等剂量生理盐水,其余各组大鼠均于右后足足底内注射CFA(0.1 mL/只),建立慢性炎性痛模型。

1.4.2 治疗方法

电针组取患侧足三里、昆仑穴(定位参照华兴邦大鼠穴位图谱)进行电针治疗。电针采用LH-202H韩氏穴位暨神经刺激仪(北京华为产业开发公司),治疗的参数为疏密波,2/100 Hz,1～2 mA(每15 min增加1 mA)。治疗时间为30 min,每日1次。消炎痛组按1.5 mg/kg剂量每日灌胃治疗1次。治疗均从造模后第1天开始至第18天处死大鼠。模型组大鼠造模后不做治疗处理,但在造模后第1天至第18天予以电针组相同的固定。

1.4.3 痛阈测量

采用足底测量仪(dynamic plantar aesthesiometer 37370,UGO BASILE)检测大鼠患足热缩腿阈(Thermal Paw Withdrawal Latency,PWL)作为痛阈指标。于造模前及造模后1 d、4 d、18 d检测所有实验大鼠右后足热缩腿阈。具体操作为测量前将大鼠置于透明塑料盒中,待大鼠安静后(停止梳理毛发和探索性活动),将聚焦的红外热源置于大鼠右后足中央,避开足垫,启动“START”按钮对足底进行热刺激,仪器自动记录大鼠缩足反应时的潜伏期和红外辐射强度。20 s是刺激时间最上限,30为最大热辐射强度。连续测量3次,每次间隔5 min。

1.4.4 ELISA测定足跖炎症组织PGE2、IL-1b含量

采用酶联免疫吸附试验检测足跖炎症组织PGE2、IL-1b含量。取足跖炎症组织,研碎,按1 mg组织加100mL裂解液(江苏碧云天)和1mL蛋白酶抑制剂(加拿大biobasic)比例加入配好的裂解液,冰浴中超声粉碎,高速低温离心后,取上清。分别按试剂盒说明书检测PGE2、IL-1b含量(pg/mg)。

1.4.5 RIA测定足跖炎症组织beta-END含量

采用放射免疫分析法。取足跖炎症组织,研碎,按1 mg组织加100mL裂解液(江苏碧云天)和1mL蛋白酶抑制剂(加拿大biobasic)比例加入配好的裂解液,冰浴中超声粉碎,高速低温离心后,取上清。将提取的上清液送至上海第二军医大学应用RIA检测足跖炎症组织beta-END含量。

1.5 统计学方法

数据均用(均数±标准差)表达,多组间比较采用单因素方差分析,析因分析采用检验。以＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 电针对大鼠患侧PWL变化的影响

由表1可见,各组大鼠造模前基础PWL比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。模型组足趾注射后,模型组、电针组、消炎痛组PWL与正常组比较,差异均具有统计学意义(＜0.01),提示慢性炎性痛模型成功建立。电针组、消炎痛组治疗后PWL与模型组比较,差异均具有统计学意义(＜0.01)。电针组治疗18 d后PWL与消炎痛组比较,差异无统计学意义(＞0.05)。

表1 各组大鼠患侧热缩腿阈比较 (±s,s)

注:与正常组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.01

2.2 电针对足跖炎症组织PGE2含量的影响

由表2可见,造模后18 d,模型组大鼠足跖炎症组织的PGE2含量显著升高(＜0.01,与正常组比较)。与模型组比较,电针组PGE2含量有降低趋势,但无统计学意义(＞0.05)。消炎痛组治疗后PGE2含量与模型组比较,差异具有统计学意义(＜0.01)。

表2 各组大鼠足跖炎症组织PGE2含量比较(±s,pg/mg)

注:与正常组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.01

2.3 电针对足跖炎症组织IL-1b含量的影响

由表3可见,造模后18 d,模型组大鼠足跖炎症组织的IL-1b含量显著升高(＜0.01,与正常组比较);与模型组比较,电针组IL-1b含量有降低趋势,但无统计学意义(＞0.05)。消炎痛组治疗后IL-1b含量与模型组比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。

表3 各组大鼠足跖炎症组织IL-1b含量比较(±s,pg/mg)

注:与正常组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.05

2.4 电针对足跖炎症组织beta-END含量的影响

由表4可见,造模后18 d,模型组大鼠足跖炎症组织的beta-END含量与正常组比较,差异无统计学意义(＞0.05)。

电针组治疗后大鼠足跖炎症组织的beta-END含量与模型组比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。消炎痛组治疗后大鼠足跖炎症组织的beta-END含量与模型组比较,差异无统计学意义(＞0.05)。

表4 各组大鼠足跖炎症组织beta-END含量比较(±s,pg/mg)

注:与模型组比较1)＜0.05

3 讨论

中医学理论认为“经脉者,所以能决死生,处百病,调虚实,不可不通。”宗“病始于足胫,先取足阳明而汗出”的治疗原则,我们选取足三里穴为治疗主穴。昆仑穴具有通利关节、舒经活络止痛作用,所以我们同时选用昆仑穴进行治疗。有研究表明,以疼痛局部或邻近穴位电针效果最佳[8-10]。国内也有研究表明[11],足三里和昆仑穴可以减轻由弗氏完全佐剂引起的慢性炎性痛,并且具有良好的治疗作用。

CFA模型是炎性痛的经典模型,在造模后1 d即可出现足跖局部的红、肿、热、痛等炎症症状,疼痛可持续4星期[12],是研究针灸治疗慢性炎性痛机制的理想模型[13]。电针镇痛作用已被广泛证实,与以往的研究结果一致[14-15],我们发现电针对慢性炎性痛有良好的治疗作用,且疗效类似传统的非甾体类抗炎镇痛药消炎痛,但在降低局部炎症组织的PGE2、IL-1b等炎性因子水平方面,电针作用不如消炎痛。因此,电针治疗慢性炎性痛可能还存在其他的调节途径。

内源性阿片肽(EOP)的外周镇痛作用日益引起人们的注意。研究表明,炎症过程中,内含阿片肽的免疫细胞在黏附分子等导向下聚集于足跖炎症组织,迁移到炎症局部的免疫细胞(T、B淋巴细胞,巨噬细胞,单核细胞)可合成大量的EOP[16]。在有效的刺激下,这些免疫细胞可释放EOP,作用于炎症局部感觉神经末梢上的阿片受体,产生镇痛作用。有报道冷水游泳可促使炎症局部EOP的释放[17]。那么,电针能否作为一种有效刺激促使外周EOP的释放呢?在本实验中,我们发现电针能显著提高慢性炎症痛大鼠炎症局部的beta-END含量,而消炎痛没有明显的影响;之前有研究也表明,足跖注射阿片受体拮抗剂纳洛酮可拮抗电针对类风湿关节炎的镇痛效应[18]。这些结果表明,外周beta-END参与电针的治疗慢性炎性痛作用。这就很好解释了本实验中为何电针在改善局部炎性因子方面作用不如消炎痛,而镇痛作用却与之相当。本研究结果表明,电针治疗慢性炎性痛可能涉及外周阿片机制,其中beta-END是重要的环节。

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Peripheral Beta-END Release-promoting Effects of Electroacupuncture in the Treatment of Chronic Inflammatory Pain

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,310053,

To investigate the dual intervening effects of electroacupuncture on inflammatory mediators and peripheral opioid peptides in local inflammatory tissue in the treatment of chronic inflammatory pain.A rat model of complete Freund’s adjuvant (CFA)-induced chronic inflammatory pain was made. Electroacupuncture at points Zusanli and Kunlun on the affected side were compared with conventional nonsteroidal anti-inflammatory drug indomethacin. Paw withdrawal latency (PWL), and prostaglandin E2(PGE2), interleukin-1b(IL-1b) and beta-endorphin (beta-END) in the plantar inflammatory tissue were measured.Both electroacupuncture and indomethacin raised pain threshold in the rats with chronic inflammatory pain. Electroacupuncture did not significantly reduce PGE2 and IL-1blevels but significantly increase beta-END levels (＜0.05) in the local inflammatory tissue. Indomethacin significantly increased PGE2 and IL-1blevels (both＜0.01) but did not produce a significant effect on beta-END levels.Electroacupuncture can promote peripheral beta-END release in the treatment of chronic inflammatory pain compared with the conventional nonsteroidal anti-inflammatory drug.

Electroacupuncture; Chronic inflammatory pain; Inflammatory mediator; Opioid peptide; Endorphin; Rats

1005-0957(2013)05-0407-03

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2013.05.407

2012-12-18

国家自然科学基金资助项目(81072855);浙江省自然科学基金资助项目(Z2100979,LY12H27015);浙江省“重中之重”学科(针灸推拿学)建设经费资助[浙教高科(2008)255号]

何晓芬(1986 - ),女,2010级硕士生

方剑乔(1961 - ),男,教授