陆再华 张福康 杨妍华

三七总皂苷对痛风的干预※

陆再华 张福康 杨妍华

目的本文以尿酸钠100µg•mL-1诱导体外急性炎症模型，观察三七总皂苷对ICAM-1表达及内皮细胞凋亡的影响，探讨临床用于痛风的价值。方法采用2.5、5.0、10.0µg•mL-1浓度的三七总皂苷进行预干预，实时定量PCR检测ICAM-1的基因表达，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果三七总皂苷组2.5、5.0、10.0µg•mL-1明显抑制细胞凋亡（6.90 ±1.07）%，与模型组比较P＜0.01；能显著抑制ICAM-1基因的表达。结论三七总皂苷显著抑制炎症因子ICAM-1的表达及细胞凋亡。

三七总皂苷；ICAM-1；痛风

三七总皂苷可以调节细胞免疫炎症因子表达的作用，具有降低氧化应激、减轻炎症[1]，可调节细胞因子水平，改善外周血T淋巴细胞亚群，调节T淋巴细胞释放保护性细胞因子增多，释放有害细胞因子减少，改善患者免疫紊乱状态，使细胞因子水平恢复正常，可增强对急性期炎症及病情活动的控制[2]，能够减轻oxLDL对内皮细胞的损伤，升高内皮细胞活性，降低内皮细胞免疫炎症因子CD40、VCAM-1的表达[3]，能抑制心肌细胞的肥大以及心肌细胞凋亡[4]。本文以尿酸钠100µg•mL-1诱导体外急性炎症模型，观察三七总皂苷对炎症因子ICAM-1表达及内皮细胞凋亡的影响，以探讨临床用于痛风患者的干预价值。

1 仪器与方法

1.1 实验仪器电热恒温水浴箱（上海精宏实验设备有限公司）；CO2恒温培养箱；超净工作台（苏州净化设备有限公司）；Olympu显微镜；Bio-Red全自动酶标仪；NAPCO，细胞培养箱；9SORVALL高速冷冻离心机；GeneMate PCR循环仪；DYY-6B电泳仪；BIO-RAD Gel DocTM XR凝胶紫外s成像系统；BD流式细胞检测仪。

1.2 方法实验方法分为空白对照组、阳性对照组、模型组（尿酸钠刺激组）、三七总皂苷（血塞通）干预组。空白对照组（200μL 1640培养液）、模型组（尿酸钠刺激组50µg•ml-1MSU溶液）、阳性对照组（50µg•ml-1吲哚美辛），三七总皂苷（血塞通）干预组（2.5、5.0、10.0µg•mL-1）。

1.3 HUVEC细胞的培养HUVEC细胞株经支原体检测符合要求，HUVEC细胞经0.25%胰蛋白酶消化，含10%胎牛血清的1640培养液中和，离心后去上清液，加含10%胎牛血清的1640培养液培养，移入细胞培养瓶中，在37℃ 5% CO2培养箱中传代培养。

1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡对处于对数生长期的HUVEC用0.25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液，调整好细胞密度为5×106/L，接种于普通细胞培养瓶中。待细胞长满后，再进行三七总皂苷药物干预，PBS收集细胞，离心去上清液，加入CD54单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，应用流式细胞仪检测细胞凋亡。观察细胞凋亡的现象，具有明显抑制细胞凋亡的作用。

1.5 统计学处理计量资料以表示，组间采用t检验，以P＜0.01为具有显著性差异。

2 痛风患者的治疗前后尿酸值变化情况

见表1。

表1 临床治疗痛风患者尿酸值的变化

3 结果

用MSU诱导刺激HUVEC细胞，对ICAM-1的基因表达进行检测。空白对照组对ICAM-1的基因表达仅有少量，模型组对ICAM-1的基因表达明显高于空白对照组P＜0.01，阳性对照组和三七总皂苷（血塞通）明显降低对ICAM-1的基因表达P＜0.01，具有显著性差异。三七总皂苷（血塞通）组2.5/µg•ml-1对MSU诱导的HUVEC致炎症模型下的ICAM-1的表达有显著抑制作用，具有抗炎作用。

流式细胞仪染色检测细胞凋亡：将收集的细胞用PBS洗涤，悬浮于buffer中，取100μL的细胞悬液于试管中，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI，混匀，于室温避光30min，在反应试管加入400μL buffer液，双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。双染后流式细胞仪检测可见，在由4个象限组成的散点图上。与正常组比较，模型组细胞凋亡率明显增加为（9.30±1.32）%；三七总皂苷组2.5、5.0、10.0μg/ml明显抑制细胞凋亡（6.90±1.07）%，与模型组比较P＜0.01，具有显著性差异。

4 结论

用尿酸钠溶液刺激血管内皮细胞株可以形成急性炎症模型，三七总皂苷（PNS）对以尿酸钠（MSU）100µg•mL-1诱导体外急性炎症模型，对MSU诱导的HUVEC损伤致炎症模型下的ICAM-1的表达都有显著抑制作用。模型组明显高于空白组P＜0.01，三七总皂苷组2.5µg•mL-1降低MSU对HUVEC刺激的基因表达，P＜0.01。三七总皂苷（血塞通）组2.5、5.0、10.0µg•mL-1明显抑制细胞凋亡（6.90± 1.07）%，与模型组比较P＜0.01。

临床应用血塞通治疗痛风患者疗效确切，使用方便，患者的依从性好，且症状得到改善，尿酸值治疗前后有显著性差异。通过临床治疗，体外药效评价，构建成分基本清楚，作用靶点明确的中药治疗方案和体系。体内外结合评价治疗标准的方法，体内主要是药物疗效的体现，体外主要是药物作用机制的探讨和评价。减少中药成分复杂，作用机理不明确的弱点，形成成分清楚、作用目标明确、质量稳定可靠的特点，同时又具有传统中成药相似的整体功能，毒副作用小的特点。

[1] 张福康,陆再华,杨妍华.三七总皂苷对细胞免疫炎症因子作用的研究进展[J].中国药师,2011,14(9)：1349-1350.

[2] 张佳红,王晋平,王慧娟.三七总皂苷调整类风湿关节炎免疫相关内环境失衡状态的临床研究[J].中国中西医结合杂志,2007, 27(7)：589-592.

[3] 刘桂林,窦迎春,刘粉叶,等.三七总皂苷对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞CD40,VCAM-1表达的影响[J].山东大学学报,2010, 48(10)：14-19.

[4] 谢辉,陈俊.三七总皂苷对心肌细胞肥大及凋亡的影响[J].山西医药杂志,2010,39(11)：1059-1060.

PNS on Gout the Hntervention

Lu Zaihua Zhang Fukang Yang Yanhua

ObjectiveIn this paper, uric acid sodium 100µg•mL-1induced acute inflammation model in vitro, to observe the effect of total saponins of three seven on ICAM-1 expression and apoptosis of endothelial cells, to investigate the clinical value of for ventilation.MethodsThe total saponins of three seven 2.5,5.0,10.0µg•mL-1concentration of pre intervention, expression of real-time quantitative PCR detection of ICAM-1 gene,cell apoptosis was detected by flow cytometry.ResultsTotal saponins of three seven groups of 2.5,5.0,10.0µg•mL-1significantly inhibited apoptosis (6.90±1.07)%, compared with model group,P＜0.01; expression can significantly inhibit ICAM-1 gene.ConclusionTotal saponins three seven inhibited the cell apoptosis and expression of ICAM-1 cytokines.

Total saponins three seven; ICAM-1; Gout

R259

A

1673-5846(2013)06-0027-02

江苏省常州市第七人民医院，江苏常州 213011

常州市科技计划项目：血塞通（三七总皂苷）对痛风的治疗及对痛风炎症损伤的ICAM-1的表达，编号（CS20109011）