马一杰，吕慧芳，尚艺曼，罗素霞，陈小兵，颜才华

郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)肿瘤内科，河南郑州450008

最新研究显示，抑癌基因的失活不仅与基因突变等遗传学改变有关，还与基因的表观遗传学调控密切相关［1-2］。甲基化、组蛋白乙酰化作为重要的基因表观遗传学调控机制之一，受到广泛关注［3-6］。TIP30作为受到众多关注的抑癌基因之一，在许多研究中均已证实与结肠癌预后密切相关［7-9］。

我们在前期研究中发现，TIP30启动子CpG岛高甲基化状态与其基因表达密切相关，且与结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶、奥沙利铂的化疗敏感性高度相关［10-11］。本实验旨在前期研究的基础上，通过TIP30基因在结肠癌细胞系HCT116和HT29中药物干预前后的表达，探讨甲基化及乙酰化对该抑癌基因表达的调控以及伊立替康(CPT-11)敏感性的改变，从而探讨结肠癌的发生机制，并为结肠癌为个体化治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料 结肠癌细胞株HCT116及HT29购自中国医学科学院细胞中心，注射用盐酸伊立替康(亿迈林)购自齐鲁制药(海南)有限公司，5-aza-2＇-deoxy-cytidine(DAC)、Trichostatin A(TSA)购自 Sigma，总RNA抽提试剂Trizol购自Invitrogen，RT-PCR试剂盒购自Promega公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养:结肠癌细胞株HCT116、HT29，含20 ml/L小牛血清的RPMI-1640培养基，37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中无菌培养，采用质量分数为0.25%的胰蛋白酶进行消化传代。

1.2.2 试验分组:对照组:同期培养不加药的结肠癌细胞;实验组:(1)DAC组:加 5 μmol/L DAC培养72 h;(2)TSA组:加TSA 300 nmol/L培养24 h;(3)联合组:加5 μmol/L DAC培养48 h后加TSA 300 nmol/L继续培养24 h。

1.2.3 RT-PCR检测各组TIP30基因的mRNA表达:购自Invitrogen公司的Trizol试剂盒，依说明书进行结肠癌HCT116及HT29细胞总RNA抽提，逆转录合成cDNA，PCR反应扩增目的基因。……