张 哲 ，闻勤生，倪 阵 ，刘震雄，王景杰，王旭霞，赵曙光

第四军医大学唐都医院消化内科，陕西西安710038

脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是 G-杆菌细胞壁的重要成分，作为一种强有力炎症反应诱导剂，能够诱导Kupffer细胞活化，合成并释放炎性介质及细胞毒性因子，参与非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的发病［1］。姜黄素是一种植物多酚，具有清除氧自由基、抗细胞增殖、抗炎、抗肿瘤等作用［2］。我们前期实验已证实［3］，姜黄素通过促进Nrf2的核转位增加抗氧化酶的表达，发挥肝脏的保护作用。近年研究发现姜黄素可通过减少炎性因子合成与释放，对NAFLD起到保护作用［4］，但具体机制目前尚不清楚。本研究通过观察姜黄素对LPS诱导Kupffer细胞炎性蛋白NF-κB及下游炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的影响，从而从Kupffer细胞角度阐明姜黄素对NAFLD的保护作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物:健康雄性SD大鼠(清洁级)，体质量(300±50)g，由第四军医大学实验动物中心提供。

1.1.2 实验试剂:姜黄素、LPS(O55:B5)均购自美国Sigma公司;NF-κB p65兔抗大鼠多克隆抗体购自英国Abcam公司;二抗FITC标记的山羊抗兔多克隆抗体和山羊血清封闭工作液均购自北京中衫金桥生物技术有限公司;山羊抗兔IgG抗体(二抗)、FITC标记的山羊抗兔多克隆抗体(二抗)和山羊血清封闭工作液均购自北京中衫金桥生物技术有限公司;ELISA试剂盒购自西塘生物技术有限公司。

1.2 实验方法和步骤

1.2.1 SD大鼠Kupffer细胞分离、培养:SD大鼠肝脏Kupffer细胞的分离培养参照文献［5］。

1.2.2 LPS和姜黄素对Kupffer细胞NF-κB核转位的影响:将分离的Kupffer细胞按1×105/ml接种于24孔板，培养48 h后，对照组:常规培养;LPS组:给予终浓度为100 ng/ml的LPS培养8 h;姜黄素组:给予25 μmol/L姜黄素干预2 h后，其余处理同LPS组。……