余泽兵 舒亦斌 雷慧慧 浙江省龙游县人民医院肿瘤外科 龙游 324400

胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达及其相关性研究

余泽兵 舒亦斌 雷慧慧 浙江省龙游县人民医院肿瘤外科 龙游 324400

目的：观察胃腺癌组织Naked1和MMP-9蛋白表达特征，探讨两者的关系及临床价值。方法：选择97例胃腺癌术后留取的蜡块作为胃癌组，选择62例正常胃黏膜组织作为正常对照组，应用免疫组织化学技术检测两组中Naked1和MMP-9蛋白表达，观察Naked1和MMP-9表达与临床病理特征的相关性。结果：胃癌组Naked1蛋白表达阳性率明显低于正常对照组（P＜0.01），MMP-9蛋白表达阳性率明显高于正常对照组（P＜0.01）。胃癌组Naked1和MMP-9蛋白表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、浸润深度、Ki67表达密切相关（P＜0.05或P＜0.01）；Naked1和MMP-9表达具有负相关性（P＜0.05），生存分析显示Naked1低表达、MMP-9高表达患者预后差。结论：胃腺癌组织Naked1和MMP-9呈异常表达，两者对病变的进展具有重要作用，术后检测Naked1和MMP-9表达可能对判断预后有一定价值。

胃腺癌 Naked1 MMP-9 免疫组化

胃腺癌临床常见，侵袭和转移是其重要的生物学行为，其发生发展是一个多基因、多阶段的演进过程，其基因和蛋白的变化与患者的预后密切相关。Naked1是Wnt信号通路的重要抑制物，近来研究显示Naked1低表达与肿瘤的生物学行为密切相关，并对病变进展有促进作用[1]。基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是细胞外基质降解蛋白的经典成员，其高表达可以促进肿瘤的进展。本实验应用免疫组织化学技术检测胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达，探讨其关系。

1 材料与方法

1.1 材 料 收集我院2005年1月—2007年11月胃腺癌手术后的蜡块组织作为观察组，纳入均符合WHO中关于胃腺癌的诊断标准，同时经两位病理主治医师再次确诊。排除术前放、化疗的患者，排除临床随访资料不完整患者。本组共97例，其中男50例，女47例，年龄39～76岁，平均55.8岁；PTNM分期：I期3例，II期45例，III期40例，IV期9例。同时选取距肿物边缘超过5cm的切缘正常胃黏膜组织62例作为对照组，其中男32例，女30例，年龄37～76岁，平均55.1岁。两组一般临床特征比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 Naked1、MMP-9和ki67蛋白检测 实验用兔抗人多克隆Naked1、MMP-9和ki67蛋白浓缩液均购自北京中杉金桥生物技术公司，正式实验前均进行预实验，选择最佳稀释比例。Naked1、MMP-9和ki67的表达应用免疫组化SP法进行检测，操作均由同一位主管病理技师完成，同时严格按照说明书操作，做好免疫组化质量控制。

1.3 免疫组化结果判定标准 Naked1、MMP-9和ki67蛋白的结果判断均经两位病理主治医师判读。阳性染色部位均定位于细胞质中，以棕黄色的颗粒样着色为阳性细胞，选择8个高倍视野（×400），以阳性细胞占全部计数细胞的百分率表示，取平均值。以平均每个高倍视野计数的呈阳性反应的细胞数≥25%为阳性，无明显阳性反应或阳性反应细胞数＜25%为阴性。

1.4 统计学方法 数据应用SAS 6.12统计软件进行统计分析，应用卡方检验、相关分析及生存分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃腺癌及正常胃黏膜组织中Naked1和MMP-9表达 胃腺癌组织Naked1表达阳性率明显低于正常胃黏膜组织（P＜0.01），MMP-9表达阳性率明显高于正常胃黏膜组织（P＜0.01），见表1。

表1 胃腺癌及正常胃黏膜组织Naked1和MMP-9表达比较 例（%）

2.2 胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达与临床病理特征的关系 胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、浸润深度和Ki67表达密切相关（P＜0.05或P＜0.01），见表2。

表2 胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达与临床病理特征的关系 例（%）

2.3 胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达的相关性

经线性相关分析显示，胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达呈负相关（r=-0.49，P＝0.0210）。

2.4 胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达与患者生存率的关系 本组患者术后均经正规系统的治疗，20例患者接受TCF方案化疗；33例患者应用FEP方案进行化疗；44例患者应用FOLFOX方案进行化疗，治疗时间2～4个周期。本组患者随访时间为8～60个月，平均30.2个月。经生存分析显示，胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达与生存时间相关（χ2=9.76，P= 0.0239），即Naked1低表达、MMP-9高表达的患者预后差，见图1～2。

3 讨论

胃腺癌机制及生物学行为复杂，其发生发展过程中基因和蛋白均明显改变。Naked1蛋白目前已被证实为经典的Wnt信号通路的抑制物[2]，在许多正常组织内均明显表达，还可能具有调节黏附蛋白的作用[3-4]。Naked1蛋白表达下降，会失去对Wnt信号通路活性的抑制，可能对细胞外基质有一定调节作用[5]。MMPs是一组结构上具有很大同源性，并能有效降解细胞外基质的蛋白质，因为结构中含有金属离子（主要是锌和钙）而得名[6]。MMP-9是基质金属蛋白酶家族的重要成员，其发挥作用时能够在细胞的表面对MMP-2等MMPs家族的成员进行有效活化，进而促进肿瘤离开原发部位发生转移[7]。也有研究显示MMP-9可以诱导肿瘤的间质细胞产生多种酶，该酶激活后被肿瘤细胞摄取到细胞膜表面，起到降解细胞外基质的作用[8-9]。

图1 Naked1蛋白表达与胃腺癌预后的关系

图2 MMP-9蛋白表达与胃腺癌预后的关系

本实验结果显示，胃腺癌组织Naked1和MMP-9异常表达，提示两者表达失调对肿瘤的发生和进展有重要作用。胃腺癌组织Naked1和MMP-9表达均与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、浸润深度和Ki67表达密切相关，提示两种蛋白参与了胃腺癌的进展，即两者参与了肿瘤的脉管播散和增殖过程。相关分析显示，Naked1和MMP-9的表达具有协同负向作用，即两者可能具有互相调节的通路作用。Naked1可能通过MMP-9对细胞外基质的降解调节肿瘤的进展。Naked1异常表达使Wnt/β-catenin通路发生障碍，引起胞浆内未被磷酸化降解的β-catenin进入核内[10]，进而调节MMP-9的改变，促进肿瘤出现侵袭和转移。生存分析显示，Naked1低表达、MMP-9高表达患者生存时间短，提示联合检测二种蛋白对预后判断可能有重要价值，由于临床分期、淋巴结转移、浸润深度和Ki67也是和肿瘤预后相关的重要因素，因此说明Naked1和MMP-9可以作为胃腺癌预后的判断指标。Naked1可能是机体肿瘤进展的多元性信号，对肿瘤发生时转录水平、黏附作用和细胞外基质的调节均有效果，但是具体机制尚有待更多实验证实。

总之，胃腺癌组织Naked1和MMP-9蛋白异常表达，二者可能具有协同作用，共同促进肿瘤的进展，术后联合检测Naked1和MMP-9的表达对判断胃腺癌的预后有一定价值。

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修回日期：2012-07-30

Correlation between Naked1 and Matrix Metalloproteinase 9 in Gastric Adenocarcinoma

YU Zebing，SHU Yibin，LEI Huihui.The People's Hospital of Longyou County，Longyou(324400)，China

Objective:To explore the relationship between Naked1 and matrix metalloproteinase 9(MMP-9)in gastric adenocarcinoma and its potential role in prognosis.Methods:Specimens from gastric adenocarcinoma tissue (n=97)and normal gastric tissue(n=62)were harvested.Expression of Naked1 and MMP-9 was determined by using immunohistochemistry.Results:Compared with the normal gastric tissue,Naked1 expression was lower but MMP-9 was higher in the gastric adenocarcinoma tissue.Naked1 and MMP-9 expression was closely related to clinical stage of carcinoma,metastasis,infiltration,and Ki67(P＜0.05 or P＜0.01).Naked1 was negatively related to MMP-9(P＜0.05).Survival analysis showed that lower expression of Naked1 and higher expression of MMP-9 was associated with poor prognosis.Conclusion:Naked1 is negatively correlated with MMP-9 in gastric adenocarcinoma and they may play a potential role in determining prognosis of gastric adenocarcinoma patients.

gastric adenocarcinoma Naked1 MMP-9 immunohistochemistry

2012-07-02