温颖婉

【摘 要】目的：采用高效液相色谱法测定地锦草分散片中槲皮素的含量。方法：色谱柱PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm），柱温35℃，流动相为甲醇-1g/L磷酸溶液（50：50），流速1.0mL/min，检测波长360nm。结果：地锦草分散片中槲皮素的的线性范围为44.8～448.0ng，加样回收率为99.2%（n=6）。结论：高效液相色谱法测定地锦草分散片中槲皮素的含量，具有分离效能高、灵敏、准确等优点，可用于地锦草分散片中槲皮素的含量测定和产品质量控制。

【关键词】地锦草分散片；槲皮素；测定方法；高效液相色谱法

地锦草分散片收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第十册中，是由地锦草提取制成的单方制剂。地锦草主要含黄酮类成分，可用于治疗细菌性痢疾、肠炎和秋季腹泻。地锦草为大戟科植物地锦或斑地锦的干燥全草，具有抗氧化、抗菌、止血、抑制肾功能损伤等作用[1]，现代药理研究表明地锦草中槲皮素成分具有抗菌、消炎、抗病毒、抗氧化作用，是本方发挥疗效的主要有效成分之一。

1.药品、试剂与仪器

地锦草分散片，由河北安国药业集团有限公司（批号066303）提供[1]。槲皮素对照品，购自中国食色谱纯，德国Merck公司产品；水为超纯水，临用新制；其他试剂为分析纯。Waters2695高效液相色谱仪、2487紫外检测器，均为美国Waters公司产品；PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，广州菲罗门科学仪器有限公司产品；Milli-QAdvantageA10型超纯水机，默克密理博公司产品。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱PhenomenexLunaC18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-1g/L磷酸溶液（50：50）为流动相；柱温35℃；检测波长为360nm；进样量10μL。理论板数按槲皮素计算应不低于2000，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取槲皮素对照品约10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL，置50mL量瓶中，加800g/L甲醇稀释至刻度，摇匀，即得[2]。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，过3号筛；取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入800g/L甲醇25mL，密塞，称定质量；加热回流1h，放冷，再称定重量；用800g/L甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10mL，加入盐酸1mL，置水浴中回流1h，取出，迅速冷却，转移至25mL量瓶；加800g/L甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察

分别吸取精密取槲皮素对照品溶液（22.4mg/L）2，5，8，10，15，20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积[3]。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程为Y=4477X-67655（r=0.9996）。结果表明，槲皮素在44.8～448.0ng范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，测定峰面积。结果：槲皮素峰面积的RSD为1.0%（n=6）。结果表明，仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液10μL，每2h进样1次，共进样6次，测定峰面积。结果：槲皮素峰面积的RSD为1.6%（n=6）。结果表明，10h内测定结果稳定。

2.7 重复性试验

取同一样品，按2.3项下方法制备6份供试品溶液并测定。结果：槲皮素含量的RSD为1.9%（n=6）。结果表明，该方法重复性良好[4]。

2.8 回收率试验

取同一批号已知含量供试品（批号为060302，槲皮素含量为0.5294mg/g），除去糖衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，分别精密加入槲皮素对照品溶液（10.75mg/L）25mL，按照2.3项下方法制备加样回收供试品溶液，测定槲皮素含量，并计算加样回收率。结果：平均回收率为99.2%，RSD为0.9%（n=6）。结果表明，该方法准确性较好。见表1。

2.9 样品测定

按2.3项下方法制备样品溶液，测定3批地锦草片中槲皮素的含量，测定结果见表2。

3.讨论

通过试验测定，地锦草中主要含黄酮类成分，考察了700g/L乙醇、800g/L甲醇、甲醇等溶剂，结果800g/L甲醇提取效率较高，且后续处理方便，因此采用800g/L甲醇作为提取溶剂；对比了超声法与回流法两种提取方法，结果二者无显著差异；比较了不同加酸量、水解时间，根据试验结果，选用加酸1mL，加热水解1h来制备供试品溶液。

参考文献：

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准： 中药成方制剂： 第十册[S].1995： 51.

[2] 孟淑君，熊凌. 地锦草有效成分提取工艺研究. 中华实用医学，2002，20（4）：75-76.

[3] 邓楠，邓银华.RP-HPLC法同时测定地锦草中4种黄酮类成分[J].中国药房，2009，20（ 18） ： 1403 - 1404.

[4] 柏雪莲，宓伟，王志强，等.地锦草体外抑菌作用研究[J].时珍国医国药，2007，18（ 11） ： 2747.