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狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物的半数致死量测定

2013-03-28蔡珍珍等

中国医学创新 2013年2期
关键词:乙酸乙酯小鼠

蔡珍珍等

【摘要】 目的:研究狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量(LD50)。方法:150只昆明种小鼠,完全随机平均分组,每组10只。腹腔注射给药,分别给予不同浓度的狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物,以小鼠急性死亡率为指标,求狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物的半数致死量(LD50)和LD50的95%可信区间。结果:狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量(LD50)分别为31.03 mg/kg、1538.58 mg/kg。结论:狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性,实验结果为进一步研究和开发狼毒大戟提供了毒性依据。

【关键词】 狼毒大戟; 石油醚; 乙酸乙酯; 小鼠; 半数致死量

狼毒大戟又名东北狼毒,为大戟科植物狼毒大戟(Eup-horbia fischeriana Steud.)的干燥根,是中药狼毒的主流商品之一,俗称猫眼草。据《本草纲目》的引证,狼毒在《神农本草经》、南北朝时期陶弘景的《本经集注》和《名医别录》、唐代苏恭的《唐本草》等著作中均有记载[1]。其味辛,性平,有毒。经过现代西医和中医的大量研究,已证实其具有良好的抗肿瘤活性成分[2]。2000年,赵奎君等分别使用狼毒大戟根的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿和石油醚的5种提取物对结核杆菌进行了体外抑菌实验[3]。实验结果显示,通过这5种方法提取的成分均有不同程度的抑菌作用,其中以石油醚提取物抑菌作用最强。其次是氯仿、醋酸乙酯。近年来,随着科学进步,肿瘤的发生机制研究与阐明、抗肿瘤靶点的寻找与确定、新型抗肿瘤药物的研发与应用均有突破性的进展,其中以纳米分子医学和分子生物学技术的发展尤为突出[4-5]。基于对狼毒大戟的研究,期望能在纳米分子水平层面做出重要的发现。因此,对于狼毒大戟的毒性研究极为必要与重要。现今抗肿瘤药物大部分还是依靠细胞毒性来发挥作用,在对抗肿瘤细胞的同时,对机体的正常细胞也存在着杀伤作用,因此,发现高效低毒的抗肿瘤新药成为当今社会的热点问题。有文献显示,狼毒大戟的石油醚和乙酸乙酯提取物的浓度为100 μg/ml时,对SGC-7901、HT-29、HeLa三种肿瘤细胞均有显著的抑制作用,其抑制率分别为56.48%,52.61%,45.37%和 52.19%,48.73%,50.12%[6]。但对于它们的毒性作用还未发现具体研究。本实验以狼毒大戟为代表,以昆明种近交系小鼠为实验对象,通过腹腔注射法,分别研究了狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量。

1 材料与方法

1.1 材料 昆明种小白鼠共150只,体重(22±2)g,雌雄各半,由大连医科大学实验动物中心提供。提供。实验室温度(20±2)℃,湿度(65±15)%。狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物,齐齐哈尔医学院提供。

1.2 实验方法

1.2.1 药物制备 取浸膏状态的狼毒大戟石油醚提取物,用植物油配制好溶液,取干燥的狼毒大戟乙酸乙酯提取物,用水溶解。采用梯度稀释法依次稀释,得到药物的各剂量组溶液。

1.2.2 LD50测定 经过预实验,测定小鼠狼毒大戟石油醚提取物的Dm、Dn值,取150只体重为(20±2)g的健康昆明种小鼠,雌雄各半,完全随机分组,每组10只。于实验前禁食不禁水12 h。设石油醚组为80只,每组分别给予石油醚提取物10.70、14.27、19.03、25.37、33.83、45.10、60.13和80.17 mg/kg乙酸乙酯组为70只,每组分别给予乙酸乙酯提取物800、1060、1410、1875、2500、3330和4440 mg/kg,行小鼠腹腔注射,注射量为0.4 ml/20 g。染毒后观察7 d,记录各组小鼠中毒症状、死亡时间和死亡数。按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。

1.3 统计学处理 运用Excel软件,按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。

2 结果

2.1 各组小鼠腹腔注射药物后的急性毒性实验结果见表1、2,LD50统计结果见表3。

2.2 毒性反应 采用腹腔注射法给药后,多数小鼠出现精神萎靡、行动迟缓、厌食、身体发抖、外界的敏感性减弱等中毒症状;濒死小鼠出现挣扎,呼吸困难等症状;死亡小鼠经尸解肉眼观察,肝脏、脾脏轻微增大。

3 讨论

从表3中可知狼毒大戟石油醚提取物的LD50为31.03 mg/kg,95%可信限为25.96~37.09;狼毒大戟乙酸乙酯提取物的LD50为1538.58 mg/kg,95%可信限为1294.59~1828.56。该实验结果提示狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性,在对其进行新药开发时应考虑其安全性评价。

参考文献

[1] 章振东,徐德昌.狼毒大戟的研究进展[J].中国甜菜糖业,2007,45(4):26-28.

[2] 李杰,张静.中药狼毒抗癌作用研究进展[J].中医研究,1996,9(5):44-46.

[3] 赵奎君,杨隽,张浦芝.5种狼毒大戟提取物对结核杆菌抗菌作用的比较[J].时珍国医国药,2000,11(7):589-590.

[4] T.Takashi,N.Mikihiko,T.Akihiro,et al.Molecular Targeting Therapy of Cancer:Drug resistance,Apoptosis and Survival Signal[J].Cancer Sci,2003,94(1):15-21.

[5] R.P.Araujo,D.Connemara,Lance A.Liotta,et al.Network-targeted Combination Therapy: A New Concept in Cancer Treatment[J].Drug Discovery Today:Therapeutic Strategies,2004,1(4):425-433.

[6] 章振东.狼毒大戟抗肿瘤活性成分的提取分离及结构鉴定[D].哈尔滨工业大学,2007.

(收稿日期:2012-09-07) (本文编辑:李静)

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