潘红，孙芳玲，王晓峰，王文，艾厚喜，张丽，安宜

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血液黏度的影响①

潘红1,2，孙芳玲2，王晓峰2，王文2，艾厚喜2，张丽2，安宜1

目的 研究莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血损伤后血液黏度的影响。方法Longa法制备大鼠局灶性脑缺血模型，造模后，分别给予莫诺苷(30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg)连续灌胃7 d，通过全自动血流变仪和微量血浆测试装置检测其全血黏度和血浆黏度。结果与假手术组相比，模型组全血黏度和血浆黏度均显著升高(P＜0.001)；与模型组相比，莫诺苷各剂量组全血黏度和血浆黏度显著降低(P＜0.001)。结论莫诺苷能有效减少大鼠局灶性脑缺血模型引起的血液黏度升高。

莫诺苷；缺血/再灌注；血液黏度；血浆黏度；大鼠

[本文著录格式]潘红，孙芳玲，王晓峰，等.莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血液黏度的影响[J].中国康复理论与实践, 2013,19(2):107-109.

缺血性脑血管病是一种高致死率和高致残率的脑血管疾病，高发于中老年人群，通常是因为一条或多条脑内动脉被血栓阻塞，进而导致局部或者全脑供血不足甚至完全中断，最终引起脑组织缺血、缺氧，甚至发生梗死等一系列病理变化[1]。血液黏度是反映血液流动性质的重要指标，包括全血黏度和血浆黏度，是反映血液中各种有形成分和血浆成分异常的综合指标。大量研究表明，脑梗死患者存在血液黏度增高。临床上常将血液黏度的检查作为预测脑卒中等血栓形成的主要手段[2]。

莫诺苷是中药山茱萸的有效单体成分。前期研究工作表明，莫诺苷对于大鼠局灶性脑缺血损伤具有神经保护作用[3]，能减少大鼠脑梗死体积[4]，增强大鼠皮层抗氧化能力[5]、抗炎能力[6]，抑制脑缺血再灌注引起的神经元凋亡[5]，改善其行为学评分[7]，而且发现莫诺苷具有抑制兔血小板聚集的作用[8]。本文采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型，旨在通过研究莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血损伤后血液黏度的影响，为进一步研究莫诺苷的脑保护作用提供依据。

1 材料和方法

1.1 药品与试剂

莫诺苷：由北京宣武医院药物研究室从山茱萸中提取制备，用高效液相色谱分析，纯度98.5%，临用前蒸馏水溶解成所需浓度的药液。阿司匹林(acetyl salicylic acid,ASA)：SIGMA公司产品，临用时蒸馏水溶解，以0.1 mol/L NaHCO3调pH至7.0左右，再加蒸馏水稀释到所需浓度。

1.2 实验动物

SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠，体重(260±20) g，由解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(军)2007-004。常规饲养，温度(24± 1)℃，湿度(55±5)%，手术前夜禁食，不禁水。

1.3 实验仪器

尼龙栓线，直径0.26 mm(2634-100)，购自北京沙东生物技术有限公司；LBY-N6B全自动自清洗血液流变仪和微量血浆测试装置，均为北京普利生仪器有限公司产品；3.8%枸橼酸钠抗凝管，肝素抗凝管。

1.4 方法

1.4.1 模型制备 参照Longa法[9]并略加改进。大鼠术前禁食12 h，用10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，消毒，剪开皮肤，钝性分离右侧颈总动脉(common carotid artery,CCA)，从CCA分叉处向上分离颈外动脉(external carotid artery,ECA)和颈内动脉(internal carotid artery,ICA)，结扎ECA和CCA近心端。在距CCA分叉处约2 mm处用眼科剪剪一斜行细小动脉切口，将经多聚左旋赖氨酸处理过的栓线插入，用眼科镊轻推栓线，直到产生阻挡感，说明栓线经CCA分叉处通过ICA入颅进入大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)，到达大脑前动脉(anterior cerebral artery,ACA)起始部，阻断MCA的所有血供，并且造成MCA供血相关区的梗死灶，此时不可再用力推入，以免扎破血管造成蛛网膜下腔出血。记录栓塞开始时间，缝合肌肉和皮肤。栓塞30 min后，缓慢拔出栓线，实现再灌注。假手术组大鼠除不插入栓线外，其余操作与手术组相同。

1.4.2 分组及给药 动物于术毕清醒后和术后第7天参照Longa法[3]进行神经功能缺损评分(1～5分)，确定造模是否成功。

随机将动物分为6组：假手术组，模型组，阿司匹林组(10 mg/kg)，莫诺苷低(30 mg/kg)、中(90 mg/ kg)、高剂量组(270 mg/kg)。每天灌胃给药1次，连续7 d。假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃。

1.4.3 全血黏度、血浆黏度测定 取末次给药后完成神经行为学评分的大鼠，用10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，收集入肝素抗凝管内，常规制备血样。测定时，轻轻摇晃血样，使其均匀，取800µl肝素抗凝血用LBY-N6B全自动自清洗血液流变仪分别测定低切变率(10/s)、中切变率(60/s)和高切变率(150/s)下的全血黏度。取剩余的肝素抗凝血于3000 r/min离心10 min，取上清血浆200µl用微量血浆测试装置检测血浆黏度[10]。

1.5 统计学分析

实验数据采用SPSS 13.0统计学软件进行统计处理，结果以(±s)表示。组间样本均数比较采用单因素方差分析(one-way analysis of variance,ANOVA)，以P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

与假手术组相比，模型组在低切变率(10/s)、中切变率(60/s)和高切变率(150/s)，全血黏度均有显著升高(P＜0.001)。与模型组相比，阿司匹林组全血黏度各切率值显著降低(P＜0.001)；莫诺苷中剂量组和高剂量组在3个切率值的全血黏度均显著降低(P＜0.001)。见表1。

表1 不同切变率下各组大鼠全血黏度比较

与假手术组相比，模型组血浆黏度显著增加(P＜0.001)。与模型组相比，阿司匹林组血浆黏度显著降低(P＜0.001)；而莫诺苷低、中和高剂量组血浆黏度均显著降低(P＜0.001)。见表2。

表2 各组大鼠血浆黏度比较

3 讨论

由于供血不足导致供氧和能量不足，脑缺血可引起细胞内兴奋性神经毒性、酸中毒、氧化应激、炎症反应和细胞凋亡等。也有临床研究表明，血液黏度的不正常升高是导致脑梗死发生的原因之一。血液黏度的升高与血流速度呈负相关，血流速度的降低，会导致血液中凝血因子以及各种血细胞在脑血管内沉积，成为脑梗死发病的基础[11]。缺血性脑卒中引起血液流变异常而导致微循环灌注不足是疾病进一步发展的重要原因[12]，如严重缺氧造成酸中毒时，红细胞膜变硬，使血液黏度升高，形成微血栓，导致微循环障碍[13]。

目前，在心脑血管疾病中广泛应用的药物如抗血小板聚集的药物能抑制血栓形成，降低血液黏度。其中阿司匹林在心脑血管疾病中广泛应用，低剂量使用可以预防动脉血栓。盐酸丁咯地尔是一种血管活性剂，已经用于脑血管病的治疗，临床数据显示其具有改善微循环的作用[14]。

有研究表明，红花、刺五加、防风、银杏叶、绞股蓝、灯盏花素等中药也有降低血液黏度的功效，但还停留在起始阶段，很少涉及单体成分[15]。本研究室从山茱萸中自行提取有效单体化合物莫诺苷，在线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型上给药7 d后，观察血液黏度的变化，发现莫诺苷能显著降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的全血黏度和血浆黏度，并且作用具有剂量依赖性。剂量越大，改善越明显。

本研究提示，莫诺苷在体内能降低大鼠局灶性脑缺血模型引起的血液黏度升高，结合前期研究，将为缺血性脑卒中机制研究及临床治疗提供重要依据。

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Effect of Morroniside on Blood Viscosity in Focal Cerebral Ischemia/Reperfusion in Rats

PAN Hong,SUN Fang-ling,WANG Xiao-feng,et al.Beijing Institute of Technology,Beijing 100081,China

ObjectiveTo explore the effect of morroniside on blood viscosity in focal cerebral ischemia/reperfusion in rats.MethodsThe animal model was induced with occlusion of middle cerebral artery(MCAO),and morroniside(30 mg/kg,90 mg/kg,270 mg/kg)was then administered intragastrically for 7 d.Whole blood viscosity and plasma viscosity were detected with auto-hemorheological instrument and microplasma testing device.ResultsCompared with sham-operated group,both whole blood viscosity and plasma viscosity significantly increased in ischemic rats(P＜0.001);however,morroniside reduced whole blood and plasma viscosity noticeably(P＜0.001).ConclusionMorroniside can inhibit the increase of blood viscosity induced by focal cerebral ischemia/reperfusion in rats.

morroniside;ischemia/reperfusion;blood viscosity;plasma viscosity;rats

R743

A

1006-9771(2013)02-0107-03

2012-11-29

2012-12-06)

1.科技部“十二五”重大创新药专项(No.2012ZX09102-201-016)；2.国家自然科学基金(No.81173575)；3.国家自然科学基金(No. 30740053)；4.北京市自然科学基金(No.7062031)；5.北京市教委科研基地-科技创新平台(No.111219)；6.北京市卫生系统高层次卫生技术人才(No. 2011-3-097)。

1.北京理工大学，北京市100081；2.首都医科大学宣武医院药物研究室，北京市100053。作者简介：潘红(1990-)，女，汉族，山东枣庄市人，硕士研究生，主要研究方向：神经药理。通讯作者：安宜。

10.3969/j.issn.1006-9771.2013.02.003