吴刘成，张柳柳，李 瑶，王胜洁，季 韧，倪尧尉，邵义祥△

（1.南通大学比较医学研究所，江苏南通226001；2.南通大学医学院，江苏南通226001）

在哺乳动物正常发育过程中，眼睑生长覆盖眼睛、融合，而后重新开放。小鼠在正常发育过程中，胚胎期约11d开始出现原始的眼睑即单层细胞上皮，随着眼睑不断生长发育覆盖了角膜，约第16.5d眼睑上缘和下缘融合，完成胚胎期眼睑闭合，出生后约14d眼睑重新开放［1-2］。B6-Co（C57BL／6-corneal opacity）小鼠是通过乙基亚硝基脲（ENU）诱变技术获得并建立的出生时眼睑开放（EOB）突变系小鼠，出生后角膜逐渐混浊，角膜混浊发生率约为43.1%［3］，突变基因定位于13号染色体上60cM附近［4］。纤维细胞生长因子10（fibroblast growth factor 10，Fgf10）基因突变小鼠也表现为出生时眼睑开放［5］，并且该基因位于突变基因定位区间。因此，本实验对该基因进行克隆测序分析，并利用实时荧光聚合酶链式反应（PCR）技术检测Fgf10基因的表达，探讨Fgf10基因与B6-Co小鼠EOB表型的关联，为研究人类遗传性眼睑缺陷形成机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 本实验所用B6和B6-Co小鼠由南通大学实验动物中心提供，小鼠饲养在清洁级屏障动物房内，实验动物生产许可证号：SCXK（苏）2008-0010，使用许可证号：SYXK（苏）2012-0030。用B6与B6-Co小鼠交配，次日清晨检栓，妊娠16.5d，麻醉取胚胎。

1.2 主要试剂与仪器 Trizol、琼脂糖为加拿大BBI公司生产；逆转录试剂盒（RT）、Taq DNA Polymerase为加拿大Fermentas公司生产；引物合成、UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒为生工生物（上海）股份有限公司生产；T载体试剂盒为美国Promega公司生产；TOP10感受态细胞、质粒小抽试剂盒为南京天根公司生产；……