王荣荣宋 宁刘晓秋

1.武警广西总队医院药剂科，广西 南宁 530003；2.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016

荠菜中黄酮类成分的积累变化研究

王荣荣1宋 宁2刘晓秋2

1.武警广西总队医院药剂科，广西 南宁 530003；2.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016

目的：测定荠菜不同生长期及不同药用部位中主要黄酮类成分2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量，确定该成分在生长过程中的变化规律及其在不同药用部位中的分布规律。方法：采用HPLC法，以2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷为对照，在270 nm测定2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量。色谱柱Diamonsil C18（5μm，200×4.6 mm），流动相乙腈－0.05%磷酸溶液（20∶80）；流速（0.8mL·min－1）；结果：2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷在21.0～210.0μg·ml－1线性关系良好；平均回收率99.8%，RSD 2.0%（n＝9）。结论：该方法简单、灵敏、准确、可靠。可用于荠菜中主要黄酮成分2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量测定，为荠菜的进一步开发利用提供依据。

荠菜；黄酮；2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷；含量；分布规律

荠菜为十字花科（Cruciferae）植物荠菜Capsella bursapastoris（L.）Medic.的干燥全草，具有平肝明目、和胃消滞的功效。民间用于治疗目赤肿痛、肾炎水肿、乳糜尿等多种疾病。国内外学者对其进行了化学成分及药理作用研究，分离得到了黄酮类［1］、有机酸类［2－3］、生物碱类［4］、氨基酸类及糖类［5］等成分，药理研究表明荠菜具有降压［6］、舒张血管、止血、收缩子宫［7］等作用，荠菜中的黄酮类成分具有抗炎［8］、抗氧化［9］等作用。荠菜在江苏、上海等地方标准及中国药品标准藏药版均有收载，蒙医药医籍中也有收载，但这些标准中仅对其进行性状与显微鉴别。近年来本研究组对荠菜中的化学成分进行了研究，从中分离得到了近10个黄酮类化合物［10－11］，其中2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷在荠菜中的含量较高，推测其为主要活性成分。试验中收集了不同生长期荠菜药材，并建立了HPLC法，测定了不同生长期荠菜药材以及不同药用部位中2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量，为荠菜的进一步开发利用奠定基础。

1 仪器与试药

Shimadzu HPLC色谱仪（LC－10 Atvp泵，DAD检测器，Class－vp工作站，日本岛津公司）；乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司）；纯净水 （杭州娃哈哈集团有限公司），其余均为分析纯。

2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷对照品由本实验室自制，结构经谱学分析鉴定［11］，HPLC归一化法检测其纯度为99.3%。荠菜药材采自沈阳市万柳塘公园，经沈阳药科大学袁久志副教授鉴定为十字花科植物荠菜Capsella bursa－pastoris（L.）Medic的全草，存放于沈阳药科大学中药分析室。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（5μm，200×4.6 mm）；流动相：乙腈－0.05%磷酸溶液（20∶80）；流速：0.8 ml·min－1；检测波长：270nm。在此条件下，样品中2″－O－α－L－阿拉伯糖异草苷峰与其它色谱峰能达到基线分离，保留时间在29 min左右，对照品与供试品的色谱图见图1。

2.2 对照品储备液的制备 精密称取2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷对照品2.1mg，置10ml量瓶中，加甲醇超声15min使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备 称取荠菜粉末2.0g，置具塞

锥形瓶中，加入体积分数为75%的乙醇100m l，密塞，浸泡1h后，回流提取，加热至微沸，并保持微沸1h，放冷，滤过，滤液60℃下减压蒸干，用体积分数为75%的乙醇定容至25m l量瓶中，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 线性关系考察 精密吸取对照品储备液，稀释得到质量浓度分别为21.0、42.0、84.0、126.0、168.0、210.0μg ·ml－1的对照品溶液，各进样10μl，以峰面积为纵坐标（Y），浓度（X）为横坐标，得回归方程Y＝4.2290×104X＋1.5043×102，r＝0.9998），表明在21.0～210.0μg· m l－1线性关系良好。

2.5 精密度试验 取质量浓度为42.0μg·ml－1的对照品溶液，按照2.1项下色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，RSD为1.3%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一样品溶液，按2.1项下色谱条件，于0、4、8、12、24h分别进样，峰面积RSD为1.7%。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.7 重复性试验 称取同批样品6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进样，测定峰面积，计算含量，平均值为0.11%，RSD为1.6%，表明重复性良好。

2.8 回收率试验 称取同批样品9份，约1.0g（含量1.100mg），精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入一定量的对照品溶液，按2.3操作制备加样回收供试品溶液，在2.1项下色谱条件下进行测定，计算平均回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 不同生长期药材及不同药用部位中含量测定结果 称取不同生长期的荠菜全草粉末各2.0g，按2.2与2.3项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，并按2.1项下色谱条件操作，采用外标法计算2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量，结果见表2。称取果期荠菜的不同部位 （根、茎、叶、花、果实和全草）粉末各2.0g，测定2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量，结果见表3。

表2 不同生长期荠菜中2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷含量测定结果

表3 荠菜不同药用部位中2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷含量测定结果

由表2可以看出，果期的荠菜中含量最高，初生期嫩叶中含量最低，说明荠菜在生长过程中黄酮类成分的含量呈逐渐增加的趋势。表3结果显示，荠菜的不同药用部位中，果实中2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量最高，其次为花，根中含量最低。

3 结论与讨论

本试验建立了HPLC法，测定了荠菜不同生长期以及不同药用部位中主要黄酮成分2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷的含量，试验结果表明该方法简便、快速、可靠，可作为荠菜药材的质量控制方法。

异荭草苷类黄酮具有抗心肌缺血的作用［12］，2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷是在异荭草苷上连接一个阿拉伯糖，推测其也具有抗心肌缺血的作用，并且其在荠菜中的含量较高，因此选择2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷作为含量测定成分。

二极管阵列检测器得到的2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷紫外光谱图中在270nm和350nm处有最大吸收，在270nm处，供试品中其它色谱峰对2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷色谱峰的干扰较小，因此选择270nm作为测定波长。

不同药用部位中，2″－O－α－L－阿拉伯糖异荭草苷在果实和花中的含量最高，但二者在全草中的生物量较小，其在全草中的含量仅次于果实和花，因此今后对荠菜全草的开发利用将具有更为广阔的前景。

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R282.71

A

1007－8517（2013）09－0014－02

2013.03.12）

王荣荣 （1985.7－），女，硕士研究生，药师，武警广西总队医院药剂科，主要从事中药质量控制方面的工作。E－Mail：zhizihuakai722＠163.com。

刘晓秋，女，教授，博士生导师，主要从事中药质量标准规范化研究及中药新药的研究。