山羊绒毛干中线粒体DNA和核DNA的提取与PCR扩增
2013-01-21耿荣庆周光现韩旭峰李碧波王小龙陈玉林
家畜生态学报 2013年3期
耿荣庆,周光现,韩旭峰,李 伟,李碧波,王小龙,陈玉林*
(1.西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;2.盐城师范学院生命科学与技术学院,江苏盐城224051)
动物毛发中不仅含有较为丰富的线粒体DNA(mtDNA),而且存在微量的核DNA(nuDNA)[1-3]。因此,毛发可以作为在DNA 分子水平上开展物种或个体鉴别、遗传多样性评估、分子进化分析等方面研究的重要生物材料。
羊绒是生长在山羊外表皮层,掩在山羊粗毛根部的一层薄薄的细绒,属于稀有的特种动物纤维。羊绒来源丰富,可以在活体上通过非损伤性取样直接获得,是一种非常易于采集、运输和保存的样品。有关羊绒DNA 的研究主要集中在运用mtDNA 标记鉴别山羊绒与绵羊毛方面,尚无nuDNA 提取与应用的相关报道[4-7]。本文探索从山羊绒毛干中样品中提取DNA(包括mtDNA 和nuDNA)的简便方法,结合采用PCR 扩增和电泳检测技术验证其可行性,为拓展羊绒样品在个体识别、遗传资源评价、分子进化和分子标记辅助育种等研究领域中的应用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 毛样的采集与处理
用剪刀剪取陕北白绒山羊和太行黑山羊不同个体的体侧部毛样(不含毛囊)各8份,装入样品袋并编号,常温保存3d后-20 ℃冷冻备用。
1.2 羊绒毛干DNA 提取
从保存的16份毛样中分别取出一小份,将每份样品放入高压灭菌后的玻璃烧杯中;往每个装有毛样的烧杯中加入20mL 70%乙醇溶液,用镊子夹住毛样洗涤1~2min,夹出毛样用吸水纸吸干乙醇溶液;再将毛样用蒸馏水洗涤3次,夹出毛样用吸水纸吸去水份。……
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